论文摘要
血管活性肠肽（vasoactive intestinal peptides,VIP）是肺内重要的感觉神经肽,主要由非肾上腺素能非胆碱能神经纤维释放,其阳性神经纤维及受体广泛分布于肺内。VIP除扩张血管外,还具有舒张气道平滑肌、抑制肺泡巨噬细胞吞噬和T淋巴细胞增殖、减少肺炎性介质释放、促进气道上皮的损伤修复、清除氧自由基和抗细胞凋亡等生物学作用,其在机体内的多种效应日益受到重视。在急性肺损伤（acute lung injury,ALI）中,肺巨噬细胞作为炎性细胞发挥着重要作用,能分泌炎性介质肿瘤坏死因子-α（tumornecrosis factor-alpha,TNF-α）和转化生长因子-β（transforminggrowth factor-beta,TGF-β）。TNF-α可能作为始动因素参与了ALI的发生、发展,既可加重ALI的炎症反应,促进成纤维细胞的增殖和胶原的沉积,又可进一步激活巨噬细胞释放氧自由基引起恶性循环;TGF-β可通过诱导纤维母细胞增生、成纤维细胞表型改变、胶原纤维及细胞外基质合成增加等多种机制参与肺的重塑。作为肺内重要的神经肽,VIP具有抗肺损伤的重要作用,可能是切断ALI启动的关键因素之一。因此,探讨VlP在调整神经肽-炎症反应网络回复到生理状态中的作用具有重要意义。目的:研究VIP对巨噬细胞和成纤维细胞在肺损伤修复的作用。方法:（1）VIP对巨噬细胞（RAW264.7）株损伤修复的影响:以巨噬细胞为研究对象,观察脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的巨噬细胞的MDA和SOD含量变化,反映肺氧化和抗氧化损伤的程度:采用RT-PCR和Western-blot法检测TNF-α和TGF-βmRNA及其蛋白的表达。（2）VIP对肺成纤维细胞（NIH3T3）株损伤修复的影响:以肺成纤维细胞为研究对象,采用MTT法测定其增殖活性;免疫细胞化学方法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）的表达;羟脯氨酸（hydroxyproline,HYP）试剂盒和RT-PCR法检测Ⅲ型胶原蛋白与mRNA的表达。结果:1.VIP对巨噬细胞损伤修复的影响（1）黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法测定SOD活力和MDA含量的结果显示:LPS刺激后巨噬细胞SOD活性减弱,MDA生成增多,表明巨噬细胞氧化损伤加重;而VIP可明显减轻此效应（P＜0.01）,应用VIP受体拮抗剂则可阻断VIP的抗氧化损伤效应。（2）RT-PCR和Western-blot检测结果显示:LPS刺激后巨噬细胞生成炎性因子TNF—αmRNA及其蛋白的表达上调,VIP预处理组则可逆转该上调作用（P＜0.01）,应用VIP受体拮抗剂后,炎性因子表达与单独应用LPS组无明显差异（P＞0.05）。TGF-βmRNA及其蛋白表达无明显变化。2.VIP对肺成纤维细胞损伤修复的影响（1）MTT法显示LPS刺激后,肺成纤维细胞增殖活性明显加强,VIP预处理可抑制其增殖活性（P＜0.01）,应用VIP受体拮抗剂可使抑制作用消失。（2）LPS刺激可使肺成纤维细胞发生表型改变,生成以α-SMA为典型特征的肌成纤维细胞。免疫细胞化学检测结果表明,LPS刺激24h后,肺成纤维细胞胞浆内出现棕黄色细颗粒状物（α-SMA）,而对照组无明显变化,表明成纤维细胞已向肌成纤维细胞转化。VIP可明显抑制肺成纤维细胞的表型改变,而其受体拮抗剂则可逆转该效应。（3）羟脯氨酸试剂盒和RT-PCR法检测结果显示,LPS刺激后,肺成纤维细胞Ⅲ型胶原蛋白和mRNA的表达与对照组相比均增强（P＜0.05）,VIP可显著减弱肺成纤维细胞Ⅲ型胶原蛋白和mRNA的表达,而VIP受体拮抗剂则可逆转VIP的效应。结论:1.LPS刺激后巨噬细胞氧化损伤加重,TNF-α分泌增多。2.LPS刺激后成纤维细胞增殖活动、胶原合成明显加强,向肌成纤维细胞转化。3.VIP可逆转LPS刺激后的上述效应,提示VIP可能参与切断急性肺损伤的启动,促进损肺伤修复。