凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1与兔颈动脉粥样硬化关系的研究

论文摘要

动脉粥样硬化（atherosclerosis, AS）是心、脑血管病的主要病理基础,颈动脉粥样硬化是缺血性脑血管病的主要原因。探讨不同危险因素与颈动脉粥样硬化发生、发展之间关系的研究对于缺血性脑血管病的防治具有重要的意义。研究表明,AS形成的过程中,氧化型低密度脂蛋白胆固醇（oxidized low density lipoprotein,ox-LDL）、壁面切应力（wall shear stress,WSS）具有重要作用。凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1（lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor-1,LOX-1）是内皮细胞表达的ox-LDL的主要受体。LOX-1参与识别、结合并转运ox-LDL进入内皮细胞及内皮下,介导ox-LDL的大部分生物学毒性作用。LOX-1是内皮细胞功能障碍、血脂异常与AS发生发展相关联的关键受体,在AS的发生发展中起重要作用。体外内皮细胞培养实验研究显示LOX-1可被血脂及血流动力因素调控,而在体内LOX-1表达受到诸多因素影响,LOX-1与AS的关系、其表达规律及调控因素尚有待于实验证实,有针对性地深入研究LOX-1,了解其在AS中的作用,对认识AS发病机制及其预防有重要临床意义,并可能为治疗提供新的靶点。由于AS的早期标识脂纹在血管内膜的位置存在选择性,常常首先出现在血管分叉、弯曲部位,提示血液流动力学因素在AS形成的过程中具有重要作用。血流动力中的WSS是血液流动时对血管壁产生的摩擦力,与血管内皮损伤、动脉硬化斑块的生长及破裂、血管重塑等过程关系密切,是诱导AS的早期始动环节,为近年国内外研究的热点。体外内皮细胞培养研究提示LOX-1可被血流动力学因素调控,但在体内LOX-1在AS血管壁的表达规律及调控因素尚不明确。本研究中应用外科部分结扎（surgical partial ligation,SPL）造成兔颈动脉狭窄,并佐以高脂饮食成功建立兔颈动脉粥样硬化模型,应用DSA、多普勒超声和病理学进行评价,在形态和病理改变上模拟了颈动脉粥样硬化性狭窄,计算内膜/中膜厚度比值（I/M）,比较各组动脉粥样硬化的程度;采用血流动力学数值模拟技术计算狭窄血管内的WSS分布;采用免疫组化染色、RT-PCR技术检测LOX-1在不同时间颈动脉壁的表达,探讨LOX-1与AS的关系及WSS的影响,并进一步分析LOX-1与AS程度、LDLC的相关性。结果表明,兔颈动脉粥样硬化血管壁LOX-1表达明显升高,主要表达在血管内皮细胞和新生内膜,LOX-1与I/M、血浆LDLC水平呈正相关,血流动力学数值模拟技术显示在狭窄血管远心端和狭窄处分别形成低WSS区和高WSS区,动脉内膜增生和LOX-1表达主要位于狭窄处和狭窄远心端,提示血流动力改变和高脂饮食均促进LOX-1表达,并且二者有协同作用, LOX-1在AS中的起重要作用,是动脉粥样硬化的促发因素。

论文目录

• 提要
• 英文缩略词
• 前言
• 第1章 文献综述
• 1 颈动脉粥样硬化模型的研究进展
• 1.1 颈动脉粥样硬化模型的分类
• 1.2 动物选择
• 1.3 颈动脉粥样硬化模型的制作方法
• 1.3.1 球囊损伤法（wire or balloon injury）
• 1.3.2 气体内膜干燥损伤法（gas injury）
• 1.3.3 电刺激法（electronic injury）
• 1.3.4 植入动脉鞘法（artery collar）
• 1.3.5 外科部分结扎法（surgical partial ligation, SPL）
• 1.3.6 高脂饮食法（high fat dietary）
• 1.3.7 移植血管动脉粥样硬化模型（vein graft atherosclerosis）
• 2 凝结素样氧化型低密度脂蛋白受体-1 与动脉粥样硬化
• 2.1 LOX-1 的表达
• 2.2 LOX-1 的结构和功能
• 2.3 LOX-1 的配体
• 2.4 LOX-1 表达调控
• 2.5 LOX-1 与动脉粥样硬化
• 2.6 LOX-1 与壁面切应力
• 2.7 展望
• 第2章 兔颈动脉粥样硬化模型的建立与评价
• 1 材料与方法
• 1.1 动物来源及分组
• 1.2 实验器材和试剂
• 1.3 饲料制备
• 1.4 实验步骤和方法
• 1.4.1 外科部分结扎（SPL）制模
• 1.4.2 动物饲养
• 1.4.3 外周血血脂检测
• 1.4.4 多普勒超声检查
• 1.4.5 数字减血管造影（DSA）
• 1.4.6 取材
• 1.4.7 颈动脉组织病理学检查
• 1.4.8 组织病理学定量分析
• 1.4.9 统计学方法
• 2 结果
• 2.1 动物成活情况及模型外观
• 2.2 多普勒超声影像
• 2.3 DSA 图像及狭窄率评价
• 2.4 外周血血脂测定
• 2.5 病理学检查
• 2.6 组织病理学定量分析
• 3 讨论
• 4 小结
• 第3章 弹性壁兔动脉粥样硬化颈动脉切应力数值模拟
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 1.2.1 参数测定
• 1.2.2 SPL 制模
• 1.2.3 动物饲养
• 1.2.4 DSA 检查
• 1.2.5 血流动力学数值模拟
• 1.3 血流速度测定
• 1.4 WSS 测定
• 2 结果
• 2.1 颈动脉压力波形
• 2.2 DSA 影像
• 2.3 速度流场
• 2.4 WSS 分布
• 3 讨论
• 4 小结
• 第4章 兔动脉粥样硬化颈动脉LOX-1 表达
• 1 材料与方法
• 1.1 研究对象
• 1.2 动物模型制备
• 1.3 标本采集和处理
• 1.4 主要实验器材和试剂
• 1.5 引物的设计与合成
• 1.6 实验步骤和方法
• 1.7 统计学处理
• 2 结果
• 2.1 免疫组化染色检测LOX-1 在颈动脉壁的表达
• 2.2 免疫组化定量分析
• 2.3 RT-PCR 检测结果
• 2.4 LOX-1 与I/M 相关分析
• 2.5 LOX-1 与LDLC 相关分析
• 3 讨论
• 4 小结
• 第5章 结论
• 参考文献
• 攻读博士期间发表的学术论文
• 致谢
• 中文摘要
• ABSTRACT