论文摘要
组织因子（tissue factor TF）又称凝血因子Ⅲ,是由263个氨基酸残基构成的跨膜糖蛋白。TF一直作为外源性凝血途径的启动者为人所知,参与并调节正常凝血功能。近年来随着对TF研究的不断深入,发现TF具有明显的生物学多样性,TF与肿瘤发展转移的相关研究已成为热点。生理状态下,TF常在巨噬细胞、成纤维细胞、血管外膜、部分上皮细胞中表达；研究表明：大多数肿瘤细胞和肿瘤血管内皮细胞表达TF。TF在肿瘤细胞高度表达,直接影响肿瘤细胞的生物学特性,如细胞生长、侵袭、血行转移等。我们在实验中应用流式细胞仪和免疫荧光染色检测发现TF在纤维肉瘤细胞（HT1080）上有强表达。研究表明TF可能与肿瘤的侵袭和血行转移相关,但目前TF影响肿瘤侵袭和血行转移的机制尚不完全清楚。肿瘤细胞的血行转移是一个多步骤的、复杂的生物学过程,要经过以下几个环节：1)原发灶肿瘤细胞的增殖及游离；2)肿瘤细胞浸润血管基底膜、游走至血管内；3)与转移部位血管内皮细胞粘附,并穿过血管内皮细胞、游走至血管外；4)转移至目标脏器并增殖。其中肿瘤细胞游走至血管内并向血管外游走是血行转移的关键环节,也是肿瘤细胞与血管内皮细胞相互作用的过程。本研究使用的肿瘤细胞血管内游走和血管外游走模型,是在胶原上培养HUVEC单细胞层,因为胶原是血管外基质的主要成分,这样即可在体外模拟构建单层血管内皮及血管外基质,然后加入肿瘤细胞,形成肿瘤细胞侵袭血管内皮的状态。形成充分融合的血管内皮单细胞层是实验中最关键的步骤,我们用吉姆萨染色观察内皮细胞在胶原表面的生长情况,以确保形成充分融合的HUVEC单细胞层；并且我们测定充分融合的HUVEC单细胞层电阻值为9.09±1.6ohm/cm2,与相关研究所报告的数值一致。实验使用的纤维肉瘤细胞（HT1080）高度表达TF,并具有较强的侵袭能力,我们观察到HT1080能够游走穿过胶原层和HUVEC单细胞层,即相当于体内的肿瘤细胞血管内游走过程；并且HT1080还能够游走穿过HUVEC单细胞层,浸润至胶原凝胶中,也相当于体内的肿瘤细胞血管外游走过程。实验发现抗TF抗体能够明显抑制HT1080向血管内和血管外游走,并具有浓度依赖性,证实了TF能够促进肿瘤细胞的血行转移。因为血管内皮细胞表面有TF的配体存在,结合我们前期对肿瘤血行转移中血管内皮细胞功能调控机制的研究,推测肿瘤细胞表达的TF通过其细胞外区域的202-219位氨基酸与血管内皮细胞表面的配体结合,诱导血管内皮细胞出现一系列变化,引起肿瘤细胞的血行转移。肿瘤细胞的侵袭也是一个复杂的生物学过程。我们为模拟肿瘤侵袭过程,设计了肿瘤细胞基质侵袭模型,在体外模拟肿瘤细胞侵袭基质的状态。我们观察到HT1080能够游走穿过胶原,并且发现抗TF抗体能够明显抑制HT1080的侵袭过程,具有浓度依赖性,证实了TF能够促进肿瘤细胞的侵袭发展。研究已经充分表明TF参与了肿瘤的侵袭、血行转移等生物学过程。虽然作用机制目前还未完全明确,TF与肿瘤的相关性研究还处于进行阶段,但TF已成为最具吸引力的肿瘤治疗的靶蛋白之一,以TF为靶点的治疗方法已展示出广阔的前景。