大鼠肾脏缺血再灌注损伤尿IL-18的水平及意义

论文摘要

目的：该实验通过建立大鼠肾脏缺血再灌注模型，观察缺血再灌注致急性肾损伤后大鼠尿液白细胞介素18（interleukin18, IL-18）的水平及变化的特点，目的是为急性肾损伤病人早期的临床诊断提供科学的实验依据。方法：1.动物分组将50只成年健康雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠随机分为假手术组（S组，25只）和模型组（M组，25只），每组又分为2h、6h、12h、24h及48h五个亚组，每亚组5只大鼠。2.动物模型的建立实验前禁食12小时，自由饮水，称取并记录各组大鼠体重。用20%乌拉坦腹腔注射麻醉，模型组大鼠取腹正中一长约3-4cm切口，钝性解剖分离肾脏包膜，充分游离双侧肾动脉，然后用无创动脉夹完全夹闭之，随后肾脏由红润迅速变为苍白。阻断双侧肾动脉30min后松开动脉夹以恢复肾脏灌注，5分钟内肾脏颜色由暗红色逐渐变红润，说明再灌注成功，随即缝合切口（整个手术过程中大鼠体温始终保持在37℃）。对照组大鼠仅游离双侧肾动脉，不夹闭即关腹。3.取材分别于各时间点用20%乌拉坦腹腔注射麻醉，打开腹腔，经下腔静脉采血约5mL和膀胱穿刺收集尿液约0.3mL，分别置于离心管中离心15分钟（3000r/min）、10分钟（3000r/min）后留取标本，置于-70℃冰箱冻存待测。紧接着处死大鼠，解剖摘除双肾，观察肾脏色泽及大小，并将其纵行解剖，经盐水冲洗后放置于10％甲醛溶液中进行固定，备行石蜡切片。4.观察指标ELISA法检测尿液IL-18、二乙酰肟法测定血尿素氮（BUN），苦味酸法测定血清肌酐（SCr）。石蜡切片经苏木素-伊红（HE）染色后于光镜下观察肾组织病理形态学改变。结果：1、尿液IL-18、血SCr、BUN检测结果：M组尿IL-18于再灌注损伤后6h开始升高，12h达高峰（p<0.05），48h仍高于假手术组（p <0.05）；尿素氮于再灌注损伤后6h升高，48h达高峰（p <0.01）；而血肌酐则于再灌注损伤后48h才显著升高（p <0.05）。S组各时间点尿IL-18、血SCr、BUN差异无统计学意义（p>0.05）。2、肾组织病理改变：（1）肉眼观察：S组肾脏外观正常，纵向剖开后颜色红润。M组见肾脏呈暗红色，体积增大，部分表面可见散在小片状出血，纵向剖开后肾皮质颜色略白，髓质呈暗红色。（2）光镜观察：S组肾脏组织结构未见异常。M组受损肾小管上皮细胞则可见普遍水肿，管腔明显扩张、刷状缘消失，另有较少量上皮细胞脱落、变性、坏死，在管腔内可看到坏死脱落的细胞碎屑；至12h时可见间质水肿压迫致管腔明显狭窄，蛋白管型于6h出现。肾小球无明显病理改变。结论：1、IRI后，血BUN水平于6h开始升高，随再灌注时间的延长，其水平亦呈上升趋势；SCr水平升高较晚，于损伤后48h才显著升高。2、IRI后后肾脏病理改变表现为肾小管及肾间质受到损伤，和急性肾损伤的病理改变特征相吻合。3、IRI后，尿IL-18的水平于6h开始升高，12h达高峰，明显早于血SCr，则提示：尿IL-18能够反映早期的急性肾损伤，为临床上AKI的早期发现和诊断提供科学的实验依据。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 英文缩略词表
• 第1章 前言
• 第2章 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 实验动物
• 2.1.2 药品及试剂
• 2.1.3 主要仪器设备
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 动物分组及模型制备
• 2.2.2 标本的采集
• 2.2.3 血尿素氮（BUN）的检测
• 2.2.4 血清肌酐（SCr）的检测
• 2.2.5 尿IL-18的检测
• 2.2.6 肾组织病理
• 2.2.7 统计学分析
• 第3章 结果
• 3.1 大鼠的一般状态
• 3.2 各指标检测结果
• 3.3 肾脏组织病理学动态观察
• 第4章 讨论
• 4.1 缺血再灌注所致大鼠急性肾损伤动物模型的建立
• 4.2 缺血再灌注所致大鼠急性肾损伤的发病机制
• 4.3 急性肾损伤时血SCr、BUN的变化
• 4.4 尿IL-18在缺血再灌注所致大鼠急性肾损伤中的作用
• 第5章 结论
• 参考文献
• 致谢
• 综述
• 参考文献
• 作者简历