蛋氨酸腺苷转移酶2B在肝癌组织中的表达及对肝癌细胞增殖的调控作用研究

论文摘要

肝细胞性肝癌（Hepatocellular Carcinoma, HCC）是一种常见的病死率极高的恶性肿瘤。每年新发病例及死亡病例约有一半都是在中国。虽然外科手术治疗的进步延长了部分早期患者的生存期,但多数患者就诊时已处于晚期,缺乏手术治疗指证,而对传统的化疗药物及放疗亦不够敏感。因此,目前亟需解决的问题在于开辟新的研究方向,积极寻找新的有效治疗靶点。HCC的发生是一个伴有慢性肝损伤的长期过程,该过程中通常伴随很多代谢异常,其中就包括S-腺苷蛋氨酸（S-Adenosylmethionine, SAM） 。 SAM是体内重要的蛋氨酸代谢产物和唯一的甲基供体,参与体内很多重要的甲基转移过程,其合成和代谢过程都主要发现在肝脏。近年来肿瘤细胞代谢和表观遗传学都是热点,如何逆转肿瘤细胞的异常代谢和甲基化修饰过程也成为新的治疗靶点,已有相关药物问市。SAM稳态对维持正常肝细胞的代谢和甲基化修饰过程都至关重要,调节维持SAM稳态有希望成为不同于传统化疗药物的肝癌治疗新方向。蛋氨酸腺苷转移酶（Methionine Adenosyltransferase, MAT）是催化形成SAM的关键酶,SAM稳态失衡与MAT类型转换和活性降低有关。MAT2B基因属于MAT家族成员之一,编码产生β调节亚基,通过降低SAM的Ki值和蛋氨酸的Km值来调控MATⅡ的活性,从而影响体内SAM含量。正常肝细胞中该基因表达量极低,但是当肝脏发生慢性病变或者癌变时其表达明显上调,从而影响体内SAM稳态,并参与调控肿瘤细胞生长和凋亡等过程。更为重要的是,我们前期研究还发现在小鼠体内将转座子插入该基因后,MAT2B蛋白表达上调,最终引发HCC的产生。本研究希望通过体内体外多层次实验进一步探讨和阐明MAT2B在HCC进展中的作用,包括在细胞水平对细胞增殖和迁移的影响,以及在动物模型中对肿瘤生长的影响以及与临床肝癌患者预后关系。主要结果如下：1.MAT2B蛋白在肝癌组织中与癌旁组织相比表达量明显上调,并且与肿瘤大小和患者临床预后有显著关系。2.CCK-8、结晶紫染色发现干扰MAT2B能明显抑制HepG2、HCCLM6细胞的增殖作用,流式细胞学检测周期发现干扰组出现明显的S-期积聚,裸鼠皮下成瘤实验也进一步证实了下调MAT2B在体内也能明显抑制肿瘤生长,Western-Blot发现抑制增殖作用可能与p-AKT、p-p38MAPK表达下调及p21、p27积聚有关。3.细胞划痕实验、Transwell发现干扰MAT2B能显著抑制HepG2、HCCLM6细胞的迁移作用,Western-Blot发现抑制迁移作用可能与MMP2、MMP9、SAMD3、Vimentin表达下调及HuR的浆核转位有关。综上所述,我们发现MAT2B在癌组织中的表达上调与患者临床预后有密切关系,而且干扰MAT2B能够有效抑制肝癌细胞的增殖和迁移作用。因此,MAT2B有望成为有效的治疗HCC的新靶点。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 第一章 引言
• 第一节 SAM在肝细胞生长、凋亡及癌变中的作用
• 第二节 MAT与SAM稳态及肝癌的关系
• 第三节 MAT2B在肝癌研究中的意义
• 第二章 MAT2B在肝癌及癌旁组织中的表达及临床意义
• 第一节 实验材料
• 第二节 实验方法
• 第三节 实验结果
• 第四节 小结
• 第三章 MAT2B对肝癌细胞生长作用的影响及作用机制
• 第一节 实验材料
• 第二节 实验方法
• 第三节 实验结果
• 第四节 小结
• 第四章 MAT2B对肝癌细胞迁移作用的影响及作用机制
• 第一节 实验材料
• 第二节 实验方法
• 第三节 实验结果
• 第四节 小结
• 第五章 讨论及全文总结
• 参考文献
• 其他HLA-DRB5拷贝数变异与系统性红斑狼疮消化道受累易感性的关联研究
• 第一节 实验材料
• 第二节 实验方法
• 第三节 实验结果
• 第四节 讨论
• 参考文献
• 综述一 血小板表面受体CLEC-2研究进展
• 参考文献
• 综述二 基因拷贝数变异在系统性红斑狼疮发病中的研究进展
• 参考文献
• 附录 在读期间发表论文
• 致谢