论文摘要
鸡败血支原体（Mycoplasma gallisepticum,MG）是引发鸡慢性呼吸道疾病（Chronic respiratory disease,CRD）和火鸡传染性窦炎（Infectious sinusitis）的病原体,给家禽生产业带来巨大的经济损失。M. gallisepticum是介于细菌与病毒之间的一类基因组最小,并能自我繁殖的原核生物。其中强毒株Rlow全基因组序列长996422bp,含742个独立编码区（CDSs）。目前尚有150个保守的假定蛋白和123个假定蛋白的功能未被确定,尤其是对MG的致病性起着重要作用的膜相关蛋白及毒力因子。本研究设计一对引物,上下游分别加入BamHⅠ和SalⅠ限制性酶切位点,应用PCR方法将MG全基因组序列中的一个预测为未知蛋白的编码基因mga0553进行扩增。扩增产物连接pGEM-T easy载体,进行克隆和测序。运用DNAStar软件将目的基因预测蛋白氨基酸序列与Rlow株进行比较,分析发现:该蛋白为保守蛋白,R（F94）、S6、F36三株的MGA0553仅有10个氨基酸发生了突变,但疏水区及α螺旋区分布未产生明显变化。将S6株的预测蛋白MGA0553氨基酸序列提交SWISS-Prot数据库,分析结果显示: MGA0553共包含376个氨基酸,带阴性电荷氨基酸（Asp+Glu）38个,阳性电荷氨基酸（Arg+Lys）44个;等电点为8.95,分子量为42kDa。采用DAS（Dense Alignment Surface）方法对该预测蛋白二级结构分析表明:在N38-55位是一个跨膜区。用SignalP 3.0进行信号肽分析,结果显示:该蛋白N1-50位可能是一个信号肽。综合分析结果表明:MGA0553可能是MG的一种分泌蛋白成分。将经BamHⅠ、SalⅠ双酶切的mga0553连接pET-32a（+）载体,转化BL21（DE3）细菌的感受态细胞,经IPTG诱导,目的基因被低效率地以包涵体形式表达。SDS-PAGE分离目的蛋白条带,切胶免疫ICR小鼠制备特异性抗体, Western-blot检测诱导表达蛋白证实MGA0553具有较强的免疫原性。以表达产物的抗血清为一抗, FITC标记的羊抗鼠IgG为二抗,通过免疫荧光染色技术检测S6、F36株菌体蛋白,结果发现:两株菌体细胞均呈现较强的绿色荧光。S6株菌体细胞在分别含有鼠抗MGA0553和S6全菌抗血清的Frey,s液体培养基中进行生长抑制试验,结果显示:菌体细胞在含有抗MGA0553血清的培养基中生长率为6×10-2%,在含抗S6全菌血清的培养基中生长率为-2.2×10-4%,结果表明抗MGA0553血清对S6株菌体细胞的生长有抑制作用。综上所述,mga0553基因是编码MG的一种膜相关蛋白,该蛋白的抗血清对MG的生长有抑制作用。其编码蛋白MGA0553在MG定居、生长、繁殖和致病等生命活动的功能尚有待进一步研究。