自体激活雪旺细胞联合脐带间充质干细胞修复脊髓损伤的实验研究

论文摘要

【目的】探讨自体激活雪旺细胞与脐带间充质干细胞各自的生长以及分化特性,分析两者的相互作用,以及联合移植在修复脊髓损伤中的作用,并评价该方法对急性脊髓损伤的疗效。【方法】通过结扎Wistar成鼠单侧隐神经从而激活自体雪旺细胞并进行体外分离、培养、纯化。取孕鼠脐带分离培养获得脐带间充质干细胞并进行体外培养、纯化、测定其生长特性及向神经细胞分化的能力。并在体外进行自体激活雪旺细胞和脐带间充质干细胞联合培养,观察两者之间的相互影响和作用,以及对脐带间充质干细胞向神经细胞分化的诱导作用。Wistar大鼠60只以IMPACTOR MODEL-Ⅱ法建立T10急性脊髓损伤模型。随机分为四组,每组15只:单纯DMEM移植对照组、自体激活雪旺细胞（autologus activated schwanncells,AASCs）移植组、脐带间充质干细胞移植组（umbilical cord mesenchymalstem cells,UCMSCs）、AASCs联合UCMSCs移植组。术后每周每组随机选取8只对实验动物进行功能评价（BBB评分）。12周后每组随机选择2只动物进行10%BDA神经顺行示踪标记,标记2周后（术后14周）处死动物。取出动物损伤段脊髓作5μm快速冰冻切片后,进行Cy3荧光探针染色、荧光免疫组化及HE染色,切片染色用显微图像分析软件Image pro plus分析处理。采用方差分析（ANOVA）及SNK-q进行统计学分析,比较各组的统计学差异。【结果】AASCs经分离纯化后在体外稳定传4代,AASCs镜下从形态上即可确定,生长状态良好。UCMSCs和AASCs共培养生长良好。术后混合细胞移植组和雪旺细胞移植组大鼠后肢感觉和运动功能恢复较另外二组明显;BDA顺行示踪,HE染色、荧光免疫组化染色显示混合细胞移植组和雪旺细胞移植组较单纯间充质干细胞移植组有较多的神经纤维穿过缺损部位,而空白对照组几乎未见再生神经纤维穿越;术后实验组大鼠后肢感觉和运动功能恢复较空白对照组明显,4周后BBB评分实验组较对照组功能恢复明显,各组之间差异有统计学意义（ANOVA检验,P＜0.05）。BDA顺行示踪,HE染色、荧光免疫组化染色显示联合移植组和雪旺细胞移植组较单纯组有较多的神经纤维穿过缺损部位,而空白对照组几乎未见再生神经纤维穿越,各组间差异有统计学意义（p＜0.05）。【结论】AASCs与UCMSCs能够相互诱导分化,可以共生。AASCs能诱导UCMSCs向神经细胞定向分化,AASCs可分泌大量神经营养因子,并能明显促进急性脊髓损伤后的轴突再生和肢体功能恢复;UCMSCs能够促进急性脊髓损伤后的轴突再生和肢体功能恢复。AASCs联合UCMSCs移植治疗急性脊髓损伤可使部分神经纤维再生。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 符号说明
• 前言
• 研究现状、成果
• 研究目的、方法
• 一、自体激活雪旺细胞的分离、培养和鉴定
• 1.1 对象和方法
• 1.2 结果
• 1.3 讨论
• 1.4 小结
• 二、脐带间充质干细胞的分离、培养和鉴定
• 2.1 对象和方法
• 2.2 实验结果
• 2.3 讨论
• 2.4 小结
• 三、自体激活雪旺细胞与脐带间充质干细胞体外联合培养
• 3.1 材料与方法
• 3.2 实验结果
• 3.3 讨论
• 3.4 小结
• 四、自体激活雪旺细胞联合脐带间充质干细胞移植修复脊髓损伤的研究
• 4.1 材料与方法
• 4.2 实验结果
• 4.3 讨论
• 4.4 小结
• 结论
• 参考文献
• 发表论文和参加科研情况说明
• 附录
• 综述
• 脐带间充质干细胞及其脊髓损伤修复中的作用
• 综述参考文献
• 致谢