论文摘要
从渤海潮间带植物盐地碱蓬根际分离获得的海洋芽孢杆菌B-9987,对尖孢镰刀菌、白菜软腐病菌和番茄青枯病菌等多种植物病原菌具有很强的抑制作用,且以B-9987活菌为生防菌的微生物农药在田间药效试验中对辣椒疫病、西瓜枯萎病、西瓜炭疽病和番茄青枯病等多种植物病害表现出较好的防治效果。然而,尚未从B-9987发酵液中分离出稳定性好的抑菌物质。本文采用抑菌活性跟踪分离的方法,从B-9987发酵液中分离出系列脂肽类新结构抑菌化合物并对其生物活性进行了研究,不仅显示了新结构抑菌物质在农用抗生素创制、医药及生物表面活性剂等方面潜在的应用前景,而且为阐明以B-9987为生防菌的微生物农药防治植物病害机理的研究奠定了物质基础。利用有机溶剂萃取和酸沉淀、硅胶柱层析、Sephadex LH-20柱层析及HPLC等分离技术,以植物病原真菌茄交链格孢菌为指示菌,从B-9987发酵液中跟踪分离到8个抑菌化合物（总称BM）。LC-MS和MS/MS结果显示它们的分子量分别为1014、1028、1042、1056、1056、1070、1070和1084。结合NMR、MS和MS/MS等技术,鉴定其中含量较大的BM-3（1042）、BM-2（1056）和BM-1（1056）等3个化合物,分别为cyclo （D-Pro-L-Gln-L-Asn-L-Ser-D-Asn1-D-Tyr-D-Asn2-D-β-aminotetradecanoic acid） cyclo （D-Pro-L-Gln-L-Asn-L-Ser-D-Asn1-D-Tyr-D-Asn2-D-β-aminoanteisopentadecanoic acid）和cyclo （D-Pro-L-Gln-L-Asn-L-Ser-D-Asn1-D-Tyr-D-Asn2-D-β-aminoisopentadecano-ic acid）,均为新结构脂肽类化合物。BM的理化性质、定量测定方法及分离工艺的探索等方面的初步研究结果表明其耐热和酸稳定性好,且利用二次酸化沉淀结合大孔树脂吸附法已将BM纯度提高至33.6%。初步的药效研究表明BM具有很好的农用抑菌活性。平板拮抗活性测定结果显示BM抑菌谱较广,对黄瓜灰霉病菌、白术白绢病菌和瓜炭疽病菌等植物病原菌的MICs均在25～200μg/mL；盆栽试验结果显示125μg/mL BM对黄瓜灰霉病的防效达95.6%,明显好于相同浓度的对照药剂嘧霉胺、40%嘧霉胺多菌灵和扑海因；田间药效试验初步结果显示500μg/mL BM对芝麻灰霉病和大白菜霜霉病的相对病指防效分别为45.8%和39.3%。此外,BM的医用活性研究结果表明,BM-1和BM-3对白色假丝酵母菌的MICs为25-50μg/mL,10-5 mol/L BM-1对人白血病细胞株HL-60抑制率为83.8%；B-9987发酵上清液的表面张力为26.9 mN/m,表明其中存在表面活性好的化合物。