论文摘要
目的:探讨不同子宫内膜癌细胞系雌激素效应环指蛋白（Efp）表达与雌激素及其选择性受体调节剂（SERM）作用之间的相互影响。方法:应用细胞生长试验检测17β-雌二醇（E2）、4-羟基他莫西芬（4OHT）和raloxifene对子宫内膜癌细胞生长的作用,同时应用荧光定量RT-PCR、ELISA和western blot方法检测以上三种药物对子宫内膜癌细胞Efp和血管内皮生长因子（VEGF）mRNA和蛋白的表达影响。并应用siRNA技术干扰Efp在子宫内膜癌Ishikawa细胞的表达以探讨Efp基因的作用。结果:E2和4OHT可以诱导子宫内膜癌Ishikawa细胞的增殖,E2(10-8M)作用24小时,Efp mRNA和蛋白表达明显升高为对照组的2倍（P＜0.01和P＜0.05）,VEGF mRNA和蛋白表达明显升高为对照组的2.85倍（P＜0.001）和2.10倍（P＜0.05）。40HT(10-7M)可使Efp mRNA和蛋白表达升高为对照组的1.5倍（P＜0.05）,VEGF mRNA和蛋白表达升高为对照组的1.94倍（P＜0.05）和1.90倍（P＜0.05）。而raloxifene则不能刺激细胞的生长和Efp及VEGF的表达。E2的这种诱导作用可部分或几乎全部被4OHT和raloxifene所抑制。shRNA可较好的干扰Efp mRNA和蛋白的表达,使Efp mRNA的表达在48小时降低约80%,72小时也可降低约60%,同时蛋白的表达也被抑制。当Efp的表达被siRNA干扰抑制后,E2对细胞增殖的作用减弱,E2和4OHT诱导VEGF的作用也随之减弱。雌激素也可以诱导子宫内膜癌HEC-1B细胞的增殖,同时上调HEC-1BVEGFmRNA和蛋白水平的表达,E2(10-8M)作用24小时HEC-1B细胞VEGF mRNA和蛋白表达明显升高为对照组的2.35倍和2.46倍（P＜0.05）。而4OHT和raloxifene则不能影响HEC-1B细胞的生长和VEGF的表达。结论:E2和4OHT通过Efp的作用诱导子宫内膜癌Ishikawa细胞VEGF的产生而调节细胞的生长。Efp可以起放大雌激素效果的作用。4OHT在子宫内膜癌Ishikawa细胞表现为雌激素的激动剂和拮抗剂,而raloxifene仅表现为雌激素的拮抗剂。雌激素可能通过其他途径诱导子宫内膜癌HEC-1B细胞VEGF的产生而促进细胞的生长。目的:探讨雌二醇（E2）和选择性雌激素受体调节剂（4OHT和raloxifene）对子宫内膜癌Ishikawa和HEC-1B细胞bFGF表达的影响。方法:应用荧光定量RT-PCR、ELISA方法检测E2、4OHT和raloxifene对子宫内膜癌Ishikawa和HEC-1B细胞bFGFmRNA和蛋白表达的影响。生物合成3条针对Efp基因的shRNA,应用阳离子脂质体转染子宫内膜癌Ishikawa细胞,以同样方法检测E2、4OHT和raloxifene对转染后细胞bFGFmRNA和蛋白表达的影响。结果:E2可以上调子宫内膜癌HEC-1B细胞bFGFmRNA的表达量为对照组的2.52±0.16倍（P＜0.05）,同时可上调细胞培养液中bFGF蛋白的分泌为（24.2±1.4）pg/ml,与对照组相比有显著意义（P＜0.05）。E2也可上调EfpsiRNA干扰前后Ishikawa细胞bFGFmRNA的表达量分别为对照组的2.56±0.17和2.14±0.06倍（P＜0.05）,同时可以上调细胞培养液中bFGF蛋白的分泌分别为（26.2±2.2）pg/ml和（23.7±1.2）pg/ml,与对照组相比有显著意义（P＜0.05）。4OHT对两种细胞bFGFmRNA和蛋白的表达有上调的趋势,但无统计学意义（P＞0.05）,raloxifene对细胞bFGFmRNA和蛋白的表达无明显影响,4OHT和raloxifene均可抑制E2对细胞bFGFmRNA和蛋白水平的上调作用。结论:E2可以调节子宫内膜癌HEC-1B和Ishikawa细胞bFGF的表达,其途径为非Efp依赖性的。目的:探讨Efp、VEGF和bFGF在子宫内膜癌组织中的表达以及与子宫内膜癌临床病理参数的关系。方法:采用荧光定量逆转录聚合酶链反应（QRT-PCR）检测正常子宫内膜、单纯性增生、复杂性增生、不典型增生和子宫内膜癌组织Efp、VEGF和bFGFmRNA的表达,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测组织裂解液中VEGF、bFGF蛋白的水平,同时采用western blot方法检测组织Efp蛋白的表达。结果:EfpmRNA在子宫内膜癌的表达量为（1.12±0.47）,低于正常对照组（P＜0.05）。VEGFmRNA在子宫内膜癌及不典型增生组的表达量分别为（3.20±0.45）和（2.51±0.37）;明显高于正常对照组（P＜0.05）,bFGFmRNA在子宫内膜癌及不典型增生组的表达量分别为（6.43±0.73）和（3.46±0.62）;明显高于正常对照组（P＜0.01和P＜0.05）,同时子宫内膜癌的表达量也高于单纯性增生组（P＜0.05）。EfpmRNA在低分化子宫内膜癌的表达量为（0.42±0.07）明显低于高分化的表达（1.68±0.22）（P＜0.05）,而与患者的年龄期别无明显相关性（P＞0.05）。VEGFmRNA的表达也与患者的年龄、组织分化程度及期别无明显相关性（P＞0.05）。bFGFmRNA的表达与组织分化程度相关,即在低分化子宫内膜癌的表达量（10.13±1.12）明显高于高分化的表达（4.97±0.86）（P＜0.05）,bFGFmRNA的表达随期别增加有升高趋势但无统计学意义,与患者的年龄亦无明显相关性。VEGF、bFGF蛋白在子宫内膜癌的表达分别为（35.25±3.13）ng/ml和（45.26±3.79）ng/ml明显高于正常对照组及单纯增生组（P＜0.05）。子宫内膜癌Efp蛋白的表达水平为（28.60±2.95）,低于正常对照组及单纯增生组（P＜0.05）。结论:VEGF、bFGF均参与了子宫内膜癌的血管生成。VEGF主要于子宫内膜癌的早期起作用,而晚期及低分化子宫内膜bFGF则起到重要的血管生成作用。原因可能是Efp的表达水平降低而使VEGF生成减少。bFGF和Efp在子宫内膜癌的表达变化提示可能与预后有关。
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