艾瑞昔布在大鼠肝微粒体内的代谢研究

论文摘要

一、背景 艾瑞昔布为我国研制的一种新型COX-2选择性抑制剂,该药通过抑制COX-2的mRNA表达而发挥抗炎作用,对急性和慢性炎症具有潜在的治疗作用。前期对艾瑞昔布体内代谢与药动学研究表明:艾瑞昔布在大鼠体内吸收迅速、良好并广泛代谢,只有低于2%的原形药物随尿和粪便排泄,主要代谢途径为4′-甲基羟基化生成4′-羟甲基艾瑞昔布（M4）,然后进一步氧化成相应的羧酸代谢物（M2）。艾瑞昔布在人体内的主要代谢途径与大鼠相似,主要生成代谢物M2和M4,同时这两种代谢产物也可以在血中检测到。 二、目的 本论文拟采用肝微粒体体外孵育实验,系统研究艾瑞昔布在大鼠肝微粒体内的代谢情况,确定细胞色素P450酶（CYP450）在艾瑞昔布主要代谢途径中的作用,阐明艾瑞昔布对大鼠CYP450的作用,为理解该药药物代谢的机制、预测药物相互作用和药物代谢多态性以及指导临床合理用药提供依据。 三、方法 采用差速离心法制备了大鼠的肝微粒体和胞浆液,建立了肝微粒体体外代谢研究模型。 以艾瑞昔布为底物研究了该药在大鼠肝微粒体中的代谢行为,并考察了辅助因子NADPH和NADH对艾瑞昔布代谢的影响。为了鉴定参与艾瑞昔布4′-甲基羟基化反应的CYP450同工酶,考察了CYP450专属性诱导剂和抑制剂对该反应的影响。 分别以M4和艾瑞昔布为底物研究了4′-羧基艾瑞昔布（M2）的生成机制,并考察了辅助因子对M2生成的影响。为了鉴定参与M2形成的CYP450同工酶,以M4为底物考察了CYP450专属性抑制剂对M2形成的影响。 雄性Wistar大鼠连续给予艾瑞昔布（50mg/kg/day）、M2（50mg/kg/day）或M4（50mg/kg/day）7天后,制备肝微粒体。同时制备未处理大鼠合并肝微粒体。测定大鼠肝微粒体的蛋白浓度及CYP450含量;并分别以非那西丁O-去乙基反应、甲苯磺丁脲羟基化反应、可待因O-去甲基反应、苯胺4-羟基化反应和硝苯地平脱氢反应评价大鼠CYP 1A、2C、2D、2E和3A的活性,以考察艾瑞昔布及代谢物

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 缩略语说明
• 第一章 绪论
• 1.1 药物代谢在新药研究中的意义
• 1.2 药物代谢酶系统
• 1.3 体外药物代谢研究方法
• 1.4 药物代谢研究中常用的分析技术
• 1.5 昔布类药物的研究概况
• 1.6 研究目的及方案
• 第二章 催化艾瑞昔布4′-甲基羟基化代谢的CYP450同工酶研究
• 2.1 材料和方法
• 2.1.1 仪器
• 2.1.2 药品与试剂
• 2.1.3 实验动物
• 2.1.4 肝微粒体的制备
• 2.1.5 肝微粒体蛋白浓度及CYP450含量测定
• 2.1.6 肝微粒体孵化实验
• 2.1.7 辅助因子考察
• 2.1.8 酶动力学研究
• 2.1.9 抑制实验
• n分析'>2.1.10 LC／MSⁿ分析
• 2.1.11 可待因O-去甲基酶活性分析
• 2.1.12 肖苯地平脱氢酶活性分析
• 2.1.13 数据处理
• 2.2 结果
• 2.2.1 大鼠肝微粒体制备
• 2.2.2 定量分析方法确证
• 2.2.3 鉴定大鼠肝微粒体中艾瑞昔布的代谢产物
• 2.2.4 辅助因子对代谢的影响
• 2.2.5 酶动力学研究
• 2.2.6 参与M4生成的CYP450酶研究
• 2.3 讨论
• 2.3.1 鉴定大鼠肝微粒体中艾瑞昔布的代谢产物
• 2.3.2 参与艾瑞昔布转化为M4的CYP450酶研究
• 2.3.3 艾瑞昔布转化为M4的米氏动力学
• 第三章 催化4′-羧基艾瑞昔布形成的代谢酶研究
• 3.1 材料和方法
• 3.1.1 仪器、药品与试剂
• 3.1.2 实验动物
• 3.1.3 肝胞浆液和肝微粒体的制备
• 3.1.4 体外孵化实验
• n分析'>3.1.5 LC／MSⁿ分析
• 3.1.6 数据处理
• 3.2 结果
• 3.2.1 M2定量分析方法确证
• 3.2.2 细胞成分孵化实验
• 3.2.3 抑制剂对M2形成的影响
• 3.2.4 酶动力学研究
• 3.3 讨论
• 3.3.1 细胞成分孵化实验
• 3.3.2 参与M4转化为M2的CYP450酶研究
• 第四章 艾瑞昔布及代谢物M2和M4对CYP450的影响
• 4.1 材料和方法
• 4.1.1 仪器
• 4.1.2 药品与试剂
• 4.1.3 实验动物
• 4.1.4 肝微粒体的制备
• 4.1.5 非那西丁O-去乙基酶活性分析
• 4.1.6 甲苯磺丁脲羟基化酶活性分析
• 4.1.7 苯胺4-羟基化酶活性分析
• 4.1.8 可待因O-去甲基酶活性分析
• 4.1.9 硝苯地平脱氢酶活性分析
• 4.1.10 数据处理
• 4.2 结果
• 4.2.1 定量分析方法确证
• 4.2.2 艾瑞昔布及其代谢物对微粒体蛋白浓度及CYP450含量的影响
• 4.2.3 艾瑞昔布及其代谢物对CYP450的诱导作用
• 4.2.4 艾瑞昔布及其代谢物对CYP450的抑制作用
• 4.3 讨论
• 第五章 结论
• 参考文献
• 致谢
• 作者简历