无机磷细菌的筛选及其Biolog和分子生物学鉴定

论文摘要

磷素是植物生长发育所必需的三大营养元素之一。土壤中大多数的磷上为无效态磷,植物无法吸收利用。施入土壤的磷肥极易与土壤中的金属离子Fe3+、Ca2+和Al3+等结合,形成难溶性的磷酸盐沉淀,使有效性下降。但难溶性的磷可以在无机解磷微生物的作用下转变为可被植物利用的可溶性磷。因此筛选分离高效的解磷细菌,不仅可以提高土壤中植物可利用的可溶性磷含量,提高作物产量,还可以减少磷肥的过量使用,避免由此引起的诸多环境问题。本研究以采自秦岭山周至县的植物根际土壤为研究对象,筛选解磷细菌,研究其解磷能力,并且通过Biolog和16S rDNA系统发育方法对得到的菌株进行分类。本研究主要得到三株高效无机解磷菌株:（1）No.9解磷细菌的菌落直径为10 mm,解磷圈直径为43 mm,D/d值为3.94;在以Ca3 （PO4） 2作唯一磷源的无机磷液体培养基中,28℃培养5 d后,培养液中可溶性磷含量为98.12 mg/L,微生物量磷含量为62.85 mg/L,在无机磷液体培养基中的总解磷量为160.97 mg/L,培养液的pH值为6.11。经过生理生化试验,No.9解磷细菌的革兰染色结果表明其属于革兰氏阴性菌,非肠道菌。通过16S rDNA测序与Genebank数据库中数据比对,No.9菌株属于Inquilinus ginsengisoli,为（Inquilinus）属（2）No.15解磷细菌的菌落直径为9 mm,解磷圈直径为35 mm,D/d值为3.78;在以Ca3 （PO4） 2作唯一磷源的无机磷液体培养基中,28℃培养5 d后,培养液中可溶性磷含量为80.37 mg/L,微生物量磷含量为53.61 mg/L,在无机磷液体培养基中的总解磷量为133.98 mg/L,培养液的pH值为5.82。经过生理生化试验,No.15解磷细菌的革兰染色结果表明其属于革兰氏阴性菌,非肠道菌。通过16S rDNA测序与Genebank数据库中数据比对,No.15菌株属于醋酸钙不动杆菌（Acinetobacter calcoaceticus） ,为不动杆菌属（Acinetobacter）。（3） No.17解磷细菌的菌落直径为7 mm,解磷圈直径为31 mm,D/d值为4.41;在以Ca3 （PO4） 2作唯一磷源的无机磷液体培养基中,28℃培养5 d后,培养液中可溶性磷含量为104.91 mg/L,微生物量磷含量为36.59 mg/L,在无机磷液体培养基中的总解磷量为141.5 mg/L,培养液的pH值为5.67。经过生理生化试验,No.17解磷细菌的革兰染色结果表明其属于革兰氏阴性菌,非肠道菌。通过16S rDNA测序与Genebank数据库中数据比对,No.17菌株属于荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens） ,为不假单胞菌属（Pseudomonas）。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述
• 1.1 植物生长与磷素营养的相关性及磷循环
• 1.1.1 磷在植物体内的含量和分布
• 1.1.2 磷对植物生长、发育的作用
• 1.1.3 磷素循环
• 1.2 国内外关于解磷微生物的研究进展
• 1.2.1 关于解磷效果的研究
• 1.2.2 关于解磷机制的研究
• 1.2.3 关于微生物促生机理的研究
• 1.3 微生物鉴定的研究手段
• 1.4 本文研究的目的及意义
• 第二章 解磷微生物的分离
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 试验材料
• 2.1.2 培养基
• 2.1.3 试剂
• 2.1.4 仪器
• 2.2 方法
• 2.2.1 土壤采集
• 2.2.2 解磷菌株的分离纯化
• 2.2.3 解磷菌株的初筛方法
• 2.2.4 解磷菌株的复筛方法
• 2.3 结果与分析
• 2.3.1 初筛结果
• 2.3.2 复筛结果
• 2.4 小结
• 第三章 解磷菌株的鉴定
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 实验材料
• 3.1.2 培养基
• 3.1.3 试剂
• 3.1.4 仪器
• 3.2 鉴定方法
• 3.2.1 生理生化检测
• 3.2.2 Biolog 鉴定
• 3.2.3 分子生物学鉴定
• 3.3 结果与分析
• 3.4 16S rDNA 鉴定结果
• 3.5 小结
• 第四章 结论与讨论
• 4.1 结论
• 4.2 讨论
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介