AFP与突变型P53融合基因转染CD34～+造血干细胞来源的树突状细胞诱导抗肝癌细胞特异性免疫反应

论文题目: AFP与突变型P53融合基因转染CD34～+造血干细胞来源的树突状细胞诱导抗肝癌细胞特异性免疫反应

论文类型: 博士论文

论文专业: 肿瘤学

作者: 贾军

导师: 任军

关键词: 甲胎蛋白,造血干细胞,树突状细胞,转染,肝癌,免疫反应

文献来源: 第四军医大学

发表年度: 2005

论文摘要: 目的:1) 以RT-PCR方法构建AFP基因真核表达载体pEGFP-AFP并进行鉴定;2) 以RT-PCR方法克隆含真核表达元件Kozak序列、启始密码子但不含终止密码子的AFP基因cDNA,连接AFPcDNA与mtP53基因构建融合基因真核表达载体pEGFP-AFP-mtP53并进行鉴定;3) 采集肝癌患者外周血CD34~+细胞,体外诱导培养DC并进行鉴定;4) 将AFP-mtP53融合基因转染DC,诱导DC产生针对AFP和mtP53抗原的特异性CTL反应,并与AFP和mtP53单基因转染诱导的特异性CTL反应比较,观察其对不同肝癌细胞株的杀伤抑制效果,评价以AFP和mtP53双抗原致敏DC诱导的针对AFP和mtP53双靶点的特异性抗肝癌CTL活性。方法:1) 体外培养人肝癌细胞HepG2,Trizol裂解细胞,提取总RNA。设计含有特定酶切位点Bgl Ⅱ、真核启动元件Kozak序列和起始密码子ATG的PCR正向引物;含有特定酶切位点Sal Ⅰ和终止密码子TAA的PCR反向引物。采用RT-PCR法克隆AFP全长cDNA,使用BglⅡ+Sal Ⅰ双酶切载体pEGFP-mtP53和AFP cDNA,将AFP cDNA连接载体pEGFP,构建新的真核表达载体,命名为pEGFP-AFP。并对真核表达载体pEGFP-AFP进行测序,保存测序正确克隆。采用脂质体转染技术将真核表达载体pEGFP-AFP转染

论文目录:

缩略语表

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前言

文献回顾

正文

1 RT-PCR方法构建AFP基因真核表达载体和鉴定

1.1 材料

1.2 方法

1.3 结果

1.4 讨论

1.5 结论

2 AFP和突变型P53融合基因真核表达载体的构建和鉴定

2.1 材料

2.2 方法

2.3 结果

2.4 讨论

2.5 结论

3 CD34~+造血干细胞诱导定向分化树突状细胞和培养

3.1 材料

3.2 方法

3.3 结果

3.4 讨论

3.5 结论

4 AFP与突变型P53融合基因转染树突状细胞诱导特异性抗肝癌免疫

4.1 材料

4.2 方法

4.3 结果

4.4 讨论

4.5 结论

小结

参考文献

附录

个人简历和研究成果

致谢

发布时间: 2005-07-19

参考文献

[1].LfcinB-P13促进肝癌细胞株的凋亡及其机制研究[D]. 孟立祥.安徽医科大学2017
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