抑黑方和促黑方调节人黑色素瘤A375细胞黑色素合成及酪氨酸酶活性的研究

论文摘要

目的：从临床治疗黄褐斑和白癜风常用中药中筛选调节黑色素合成的有效中药以研制抑制和促进黑色素合成的中医方剂，观察该方对黑色素合成及酪氨酸酶活性的作用，探讨抑黑方和促黑方治疗色素障碍性皮肤病的作用机制和中医病机，为中医治疗色素障碍性皮肤病提供有效方剂。方法：从近30年中国期刊全文数据库检索治疗黄褐斑和白癜风总结出常用270味中药作为候选中药，用95%乙醇室温提取1周制备中药醇提物；以100μg/ml药物浓度处理人黑色素瘤A375细胞48小时后，用MTT法测定细胞生长活性，用NaoH裂解法测定黑色素含量，计算药物抑制或促进黑色素合成率，选出黑色素合成抑制率或促进率高的药物，分别检测药物作用量效关系；运用正交试验设计优选出最佳的药物组合组成抑制或促进黑色素合成方剂，分别命名为抑黑方和促黑方。检测抑黑方和促黑方对人黑色素瘤A375细胞黑色素合成的量效和时效关系，用多巴氧化法检测对人黑色素瘤A375细胞酪氨酸酶活性的量效和时效关系，在倒置显微镜下观察黑色素瘤A375细胞形态变化并拍照。结果：1.调节人黑色素瘤A375细胞黑色素合成中药的筛选和方剂研制。分别用270味中药醇提物以100μg/ml浓度处理人黑色素瘤A375细胞48h后，对加药组与对照组的黑色素含量和细胞数光密度值（OD）进行单因素方差分析，选择对黑色素合成有明显差异而对细胞数无明显差异的药物，结果确定抑制黑色素药物6味：荔枝核、香附、猪苓、薏苡仁、枸杞子和龟板；促进黑色素药物6味：木香、川楝子、巴戟天、杜仲、蝉蜕和白芷。经过正交试验分析优选出由分别上述两组中药组成的抑制黑色素合成方和促进进黑色素合成方，分别命名为抑黑方和促黑方。2.抑黑方和促黑方对人黑色素瘤A375细胞黑色素合成作用呈量效和时效关系。当抑黑方和促黑方药物浓度为6.25～100μg/ml时,随着药物浓度增加,对人黑色素瘤A375细胞黑色素合成抑制率和促进率都增强，药物浓度至100μg/ml时达到最高峰值；当浓度为200～800μg/ml时,随着药物浓度增高，黑素抑制率和促进率都呈下降趋势，至800μg/ml时都降至最低峰值。3.抑黑方和促黑方对人黑色素瘤A375细胞酪氨酸酶活性作用呈量效和时效关系。抑黑方和促黑方浓度为6.25～100μg/ml时，随着药物浓度增加，对人黑色素瘤A375细胞酪氨酸酶活性抑制率和促进率都增加，药物浓度为100μg/ml达最高峰值；当浓度为200～800μg/ml时，随着药物浓度增加，对酪氨酸酶活性抑制率和促进率都呈下降趋势，至800μg/ml时降至最低峰值。4.正常人黑色素瘤A375细胞镜下呈梭形，当用100μg/ml药物浓度处理细胞48小时后，抑黑方与对照组比较，细胞体积减小，细胞树突变少，细胞内黑素颗粒明显减少；促黑方与对照组比较，细胞体积增大，细胞树突增多，细胞呈梭形，三级或多级，细胞内黑素颗粒显著增加。结论:1.本研究为治疗色素障碍性皮肤病提供了有效方剂抑黑方和促黑方。2.抑黑方抑制黑色素合成和促黑方促进黑色素合成具有剂量和时间依赖性作用。3.抑黑方和促黑方对黑色素合成作用与调节酪氨酸酶活性作用呈正相关。4.通过文献分析和实验研究结果表明：色素障碍性皮肤病存在肝郁、肾虚、风湿邪侵病机。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 材料与方法
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 统计学分析方法
• 结果
• 1 调节人黑色素瘤 A375 细胞黑色素合成中药的筛选
• 2 所选 12 味中药对人黑色素瘤 A375 细胞黑色素合成的作用
• 3 正交实验确定抑制黑色素合成和促进黑色素合成最佳药物组合
• 4 抑黑方和促黑方对人黑色素瘤 A375 细胞黑色素合成的作用
• 5 抑黑方和促黑方对人黑色素瘤 A375 细胞酪氨酸酶活性的作用
• 6 抑黑方和促黑方对人黑色素瘤 A375 细胞形态学的影响
• 讨论
• 1 抑黑方和促黑方对人黑色素瘤 A375 细胞黑色素合成的作用
• 2 抑黑方和促黑方对人黑色素瘤 A375 细胞酪氨酸酶活性的作用
• 3 抑黑方和促黑方体现中医对色素障碍性皮肤病病因病机的探讨
• 结论
• 参考文献
• 附录 1 文献综述
• 参考文献
• 附录 2 在校期间论文论著和科研情况