论文摘要
干细胞研究在人类生命科学中具有重要的基础研究意义,在人类健康和生命质量领域具有广泛的应用前景。胚胎干细胞来源于受精卵发育早期胚胎的内细胞团,具有发育的全能性,可以分化为体内所有类型的成熟细胞。在发育生物学、细胞治疗、组织器官工程等研究和开发中具有巨大的潜力。 为了全面认识ES细胞的特性并为今后进行转基因动物、组织工程研究做好铺垫,我们进行了小鼠ES细胞的建系研究,以ICR种和昆明种小鼠为实验对象,采用超数排卵的方法获得孕3.5d小鼠囊胚,培养在用丝裂霉素C处理过的MEF细胞饲养层上,选取适当时间离散增殖的ICM和类ES细胞集落,分析了在小鼠ES细胞建系过程中,饲养层细胞、消化液及不同品系来源的胚胎的影响。结果,ICR小鼠和昆明小鼠两种来源的饲养层细胞对胚胎贴壁、ICM增殖无影响;消化液浓度和作用时间对ICM的影响明显,以较低浓度的胰酶和EDTA消化为宜;另外,血清质量、培养板质量等因素可能影响建系。 为了探讨小鼠胚胎干细胞分化神经细胞的功能特性,及其分化过程中N-甲基-D-天冬氨酸（N-methyl-D-aspartate,NMDA）受体的表达情况,我们利用全反式维甲酸（RA）诱导胚胎干细胞拟胚体定向分化为神经细胞,用摄像相差显微镜观察分化神经细胞的形态,用免疫细胞化学方法鉴定分化神经细胞表达特异性抗原,用逆转录—聚合酶链反应（RT-PCR）检测分化神经细胞Calbindin D28K和NMDA受体（NR）亚型mRNA的表达情况,用荧光共聚焦显微镜检测分化神经细胞在NMDA刺激下胞内游离Ca2+浓度的变化。结果显示,1×10-6mol/LRA的培养基诱导培养ES细胞拟胚体4天,在拟胚体周围出现大量神经样细胞,分化神经细胞的比率与拟胚体的大小有关;撤除RA继续培养4d后可以检测到NR2B mRNA的转录,NR2C有弱的转录;在第6d后NR2A有转录;在第8d及其之后NR1的转录出现。撤除RA继续培养8天后在拟胚体周围出现大量神经样细胞;RT-PCR检测显示有Calbindin D28和NR1、NR2A、NR2B、NR2C mRNA的转录;在NMDA刺激下胞内游离Ca2+浓度明显升高（P<0.01）。提示,用RA诱导ES细胞分化的神经细胞NMDA受体亚型的表达与中枢神经发育过程中神经细胞NMDA受体亚型的表达具有一定的相似性。用RA诱导ES细胞分化的神
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标签：胚胎干细胞论文; 体外培养论文; 定向诱导分化论文; 神经前体细胞论文; 神经细胞论文; 受体论文; 功能特性论文; 分化机制论文;