原发型肺癌抑癌基因RASSF1A启动子甲基化研究及临床意义

论文摘要

实验背景:目前关于肺癌发生机制的研究主要集中于分子和细胞生物学水平,包括抑癌基因在内的相关基因的失活在原发型肺癌的发生发展过程中发挥重要作用。基因的失活方式有很多,而启动子CpG岛的异常甲基化受到越来越多的重视。最近的研究证实新型抑癌基因RASSF1A启动子CpG岛高甲基化可能在原发型肺癌的发生发展过程中都发挥重要作用,并且是导致抑癌基因失活的重要机制。本实验通过检测原发型肺癌中RASSF1A启动子的甲基化状态,探讨其与肿瘤临床特征及与术后非小细胞肺癌预后的关系,为临床原发型肺癌的早期诊断和预后评价提供理论依据。实验方法:采用酚/氯仿抽提法提取术后新鲜组织及石蜡包埋组织的基因组DNA,使用甲基化特异的PCR（methyl-specific PCR,MSP）检测手术切除的212例非小细胞肺癌组织、31例小细胞肺癌组织、34例癌旁正常组织和25例肺部良性病变中RASSF1A启动子甲基化状态。PCR产物回收,连接于pTA2载体转入大肠杆菌中,挑选阳性克隆测序,确定RASSF1A启动子甲基化程度。实验结果:212例非小细胞肺癌中81例存在RASSF1A启动子高甲基化（81/212,38.2%）,31例小细胞肺癌中23例存在RASSF1A启动子高甲基化（23/31,74%）,明显高于非小细胞肺癌。34例癌旁正常组织中无一例存在RASSF1A启动子高甲基化（0/34）,25例肺部良性病变中无一例存在RASSF1A启动子高甲基化。测序结果表明RASSF1A启动子区域CpG为高甲基化状态。非小细胞肺癌中,RASSF1A启动子甲基化与年龄、性别、是否吸烟、细胞病理类型、TNM临床分期、肿瘤病灶特征均无关（P>0.05）。但在20岁前开始吸烟的病例RASSF1A启动子发生甲基化频率高于20岁之后开始吸烟的病例（P=0.015）;低分化肺癌发生RASSF1A启动子甲基化频率高于中分化和高分化肺癌（P=0.000）,但中分化和高分化肺癌组织之间并无差异;存在淋巴结转移的病例RASSF1A发生甲基化的频率高于无淋巴结转移的病例（P=0.001）。150例非小细胞肺癌病例进行生存分析,存在RASSF1A启动子高甲基化的病例预后较未发现RASSF1A甲基化的病例差（P=0.004）,cox regression分析RASSF1A启动子的甲基化状态是非小细胞肺癌的一个预后相关因素（RR=1.584,95%CI=1.040-2.411,P=0.032）。结论:用MSP法检测抑癌基因RASSF1A启动子甲基化状态可以作为原发型肺癌的早期鉴别诊断和非小细胞肺癌的预后评定候选指标之一。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 论文 原发型肺癌抑癌基因 RASSF1A 启动子甲基化研究及临床意义
• 前言
• 第一部分 甲基化特异性 PCR 方法的建立
• 实验目的
• 实验对象
• 实验器材和试剂
• 实验方法
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 第二部分 抑癌基因 RASSF1A 启动子甲基化研究及临床意义
• 实验对象
• 实验方法
• 统计处理
• 实验结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 抑癌基因 RASSF1A 启动子甲基化在肿瘤中的研究进展
• 正文
• 参考文献
• 致谢