论文摘要
研究背景和目的:癫痫是中枢神经系统（central nervous system, CNS）常见疾病,由于癎性发作没有预见性,为急救治疗带来一定的困难。其中癫癎持续状态尤应受到重视,其致残率和死亡率相当高,从速控制发作是治疗的关键。苯二氮唑类静脉用药是目前癫痫持续状态的首选药物及用药途径,但在缺少医护人员在场的情况下,其应用受到一定限制,且其反复静脉给药容易形成体内药物蓄积。因此,寻找一条靶向中枢神经系统的便捷、快速、高效的给药途径成为近年来的研究热点。鼻腔因其与大脑在解剖结构上的特殊性[1],而引起人们的关注。本实验即通过分析地西泮（diazepam, DZ）的丙二醇溶液,鼻腔给药后,其在血液和脑脊液（cerebrospinal fluid, CSF）中的药代动力学参数,并与其静脉给药后的药代动力学参数进行比较,以初步探索DZ鼻腔给药用于临床治疗的可行性,为该药鼻腔给药成为静脉注射给药的一种替代或首选途径提供实验依据。方法:四只健康成年家犬,随机分为A,B两组,A组先鼻腔给药,间隔15天（洗脱期）后,再静脉给药;B组先静脉给药,15天（洗脱期）后,再鼻腔给药。两组均在给药后2、5、8、11、15、30、45、60、90min同时采集血液和CSF标本。所有标本采集完毕后,采用高效液相色谱（high performance liquid chromatography, HPLC）法检测其血药浓度和CSF中药物浓度,并用梯形法计算其药-时曲线下面积（area under the drug concentration-time curve, AUC）。组内采用描述性,组间采用方差分析对数据进行统计学处理。结果:（一）HPLC采用Nova-Pak C18柱（3.9mm×150mm,4μm）为固定相,甲醇:水=70:30（v/v）为流动相,流速1ml·min-1,柱温:室温,紫外检测波长:254nm建立了测定条件。绘制DZ血浆样品标准曲线,得回归方程: Y=6.05e+001X-9.96e+002, r=0.9989（n=5）, DZ的血药浓度在502000ng·ml-1范围内线性关系良好,回收率为88.5599.97%,日内及日间变异系数均小于5%,最低检测限为15μg·L-1（S/N≥3）。绘制DZ脑脊液样品标准曲线,得回归方程:Y=3.58e+001X-7.06e+002, r=0.9999 （n=5）,脑脊液中药浓度在10200ng·ml-1范围内线性关系良好,回收率为98.71101.20%,日内及日间变异系数均小于5%,最低检测限为2μg·L-1 （S/N≥3）;（二）DZ静脉给药组:血药浓度在给药后即刻达高峰,峰浓度为1742±110.18ng·ml-1（n=4）,药-时曲线下面积（AUCIV-P）为21795±1402.83 min·ng·ml-1（n=4）;CSF内药物浓度在给药后5min左右达高峰,峰浓度为84.06±14.08 ng·ml-1（n=4）,药-时曲线下面积（AUCIV-CSF）为3020.38±220.97 min·ng·ml-1（n=4）;（三）DZ鼻腔给药组:血药浓度在给药后即刻达高峰,峰浓度为1053.75±118.02ng·ml-1（n=4）,药-时曲线下面积为（AUCIN-P） 14450.25±560.11min·ng·ml-1（n=4）;CSF内药物浓度出现双峰现象,在给药后8min左右第一次达高峰,峰浓度为58.23±3.48ng·ml-1（n=4）,在给药后60min时第二次达高峰,峰浓度为29.30±1.32ng·ml-1（n=4）,药-时曲线下面积（AUCIN-CSF）为2395.79±162.43min·ng·ml-1（n=4）;（四）DZ鼻腔给药的绝对生物利用度（FIN= AUCIN-P/AUCIV-P）为66.56±5.87%（n=4）,鼻腔给药组血药浓度-时间曲线下面积（AUCIN-P）低于静脉给药组血药浓度-时间曲线下面积（AUCIV-P）（P<0.01）;鼻腔给药组CSF药-时曲线下面积（AUCIN-CSF）为静脉给药组CSF药-时曲线下面积（AUCIV-CSF）的0.7972±0.09%（n=4）,两组数据间无显著性差异（P>0.05）;（五）静脉给药组CSF渗透指数（FCSF-IV=AUCIV-CSF/AUCIV-P）为13.88±1.03%（n=4）,最高为14.83%,鼻腔给药组CSF渗透指数（FCSF-IN=AUCIN-CSF/AUCIN-P）为16.58±0.98% （n=4）,最高为17.65%,鼻腔给药组脑脊液渗透指数高于静脉给药组（P<0.01）。结论:1. HPLC法检测DZ,方法成熟,操作简便,重复性好,灵敏度高,可用于DZ多种生物样品的测定;2.与静脉给药相比,DZ鼻腔给药绝对生物利用度高,血中DZ达峰时间一致;CSF内DZ达峰时间略晚于静脉给药,但仍可在数分钟内达高峰,且浓度可达静脉给药水平; 3. DZ鼻腔给药,吸收完全而迅速,脑脊液渗透性好,可以满足临床癫痫持续状态院外急救处理的需要。