杂交稻种子DNA指纹图谱及分子水平检测技术研究

论文摘要

分子标记是随分子生物学和生物技术的迅速发展而形成的新的遗传标记方法,与形态标记、细胞学标记和生化标记三类遗传标记技术比较,具有独特的优点。目前最常用的分子标记技术主要有RFLP、RAPD、SSR、AFLP等。应用DNA分子标记鉴定品种真伪和种子纯度具有准确可靠、成本较低等特点,正成为品种鉴定的发展趋势。可为经营者杜绝伪劣种子上市和育种者品种权益保护提供法律依据。本研究应用SSR分子标记技术对目前湖南省超级杂交稻17个先锋或苗头组合种子样品进行品种真实性和纯度鉴定,并以湖南夏季和海南冬季田间种植鉴定结果为对照,比较SSR鉴定和两地田间种植鉴定结果的差异。其结果如下:（1）对分布于水稻1～12号染色体的332对SSR引物进行了筛选,有29对能够在实验材料中显示较好的多态性,占检测引物的8.7%,通过杂种表现为父母本互补带型的特点,找到了在杂交稻组合及其亲本间具有多态性的引物,建立了用于鉴定水稻品种纯度的由29个核心引物组成的核心引物库,以及筛选针对特定组合产生多态性的特异引物,进而针对不同杂交稻种子纯度设计了鉴定方法,并提供作为鉴定参考的图谱。（2）用筛选出的引物鉴定17个杂交稻组合F1代种子纯度,SSR分子标记技术鉴定结果与湖南、海南种植鉴定结果基本一致。SSR分子标记技术鉴定的平均纯度为97.19%,湖南种植鉴定的平均纯度为97.20%,海南种植鉴定的平均纯度为97.94%。（3）用表现多态性的引物17对人为掺假的金优299进行纯度鉴定,能将掺入组合中的假种子区分开,鉴定结果与掺杂的实际情况完全一致。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 1 研究的目的与意义
• 1.1 研究的目的
• 1.2 研究的意义
• 2 国内外研究动态与发展趋势
• 2.1 蛋白质指纹鉴定技术
• 2.1.1 同工酶电泳法
• 2.1.2 种子贮藏蛋白电泳法
• 2.2 DNA分子标记技术
• 2.2.1 RFLP技术
• 2.2.2 AFLP技术
• 2.2.3 RAPD技术
• 2.2.4 SSR技术
• 材料与方法
• 1 试验材料
• 2 研究内容
• 3 试验方法
• 3.1 SSR分子标记筛选特异引物，建立DNA标准图谱
• 3.1.1 CTAB法提取DNA
• 3.1.2 PCR反应体系及扩增程序
• 3.1.3 凝胶电泳
• 1）纯度田间种植鉴定'>3.2 杂交种（F₁）纯度田间种植鉴定
• 3.2.1 长沙种植鉴定
• 3.2.2 海南种植鉴定
• 结果与分析
• 1 不同DNA提取方法的效果
• 2 SSR分析
• 3 种子人为掺杂验证
• 4 实验室鉴定与田间鉴定比较分析
• 小结与讨论
• 1 核心引物库的建立
• 2 杂交稻组合指纹图谱的建立
• 3 完善和实用的SSR分子标记技术体系的建立
• 4 杂交水稻种子纯度SSR鉴定技术的可靠性和实用性
• 5 存在的问题
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介