论文摘要
为了探讨代谢信号对奶牛脂肪细胞脂联素和激素敏感脂肪酶的影响，在体外单层培养13d的犊牛的成熟脂肪细胞中，添加不同梯度浓度的胰岛素(0、5、10、20、50、100nmol／L)、胰高血糖素(0、25、100、200、500、1000pg／mL)、葡萄糖(0、5、10、15、20、25 mmol／L)；体外培养3d的犊牛小网膜脂肪组织中添加不同梯度浓度的非酯化脂肪酸(0、0.5、1.0、1.5mmol／L)并设置三个重复，添加后24h提细胞总RNA，通过荧光定量PCR技术，观测这些不同梯度浓度的几种代谢信号对牛脂肪细胞ADPNmRNA与HSLmRNA丰度的影响。实验结果表明：①ADPN基因的表达随着添加的胰岛素浓度增长而减少。5nmol／L、10nmol／L浓度的胰岛素抑制ADPN基因的表达但差异不显著(P＞0.05)，浓度为20nmol／L的胰岛素显著抑制ADPN基因的表达(P＜0.05)，而当胰岛素浓度达到50nmol／L、100nmol／L时则极显著的抑制其基因表达(P＜0.01)。HSL基因的表达也随着添加的胰岛素浓度增长而减少。添加5nmol／L和10nmol／L的胰岛素组虽抑制了HSL基因表达，但与对照组相比较，其差异均不显著(P＞0.05)，其它浓度(20、50、100nmol／L)的胰岛素均极显著的抑制HSL基因表达(P＜0.01)；②胰高血糖素促进ADPN与HSL基因的表达(P＜0.05)，当添加浓度为200 pg／mL或小于此浓度时与对照组比较差异不显著。当胰高血糖素浓度为500pg／mL和1000pg／mL时极显著的促进ADPN基因的表达(P＜0.01)。25pg／mL浓度或以上浓度梯度(100、200、500、1000pg／mL)的胰高血糖素均极显著的促进HSL基因表达(P＜0.01)；⑧5mmol／L浓度的葡萄糖显著抑制ADPN基因的表达(P＜0.05)，其它梯度浓度(10、15、20、25mmol／L)的葡萄糖均极显著的抑制ADPN基因的表达(P＜0.01)。20mmol／L、25mmol／L浓度的葡萄糖显著(P＜0.05)促进HSL基因的表达，其它浓度(5、10、15mmol／L)的葡萄糖对促进HSL基因表达不显著(P＞0.05)；④0.5mmol／L浓度的NEFA虽然促进了ADPN基因的表达，但其差异不显著(P＞0.05)，当NEFA达到1.0mmol／L浓度时它对ADPN的基因表达有显著的促进作用(P＜0.05)，当NEFA浓度为1.5mmol／L时它对ADPN的表达呈下降趋势(P＞0.05)。添加NEFA还有降低脂肪细胞内HSL拷贝数(Qty)的趋势，但三个添加组(0.5、1.0、1.5mmol／L)与空白对照组相比较其差异均不显著(P＞0.05)。实验结果表明：胰岛素抑制ADPN、HSL基因表达，其抑制作用呈剂量依赖性；胰高血糖素促进ADPN、HSL基因表达，其促进作用呈剂量依赖性；葡萄糖抑制ADPN基因表达，促进HSL基因表达，其抑制和促进作用呈剂量的依赖性；不超过1.0mmol／L浓度的非酯化脂肪酸促进ADPN基因的表达，超过该浓度时ADPN基因的表达量开始有下降的趋势。非酯化脂肪酸对HSL基因的表达有抑制作用，其抑制作用呈剂量的依赖性。