紧密连接蛋白CLAUDIN-1在大肠杆菌性腹泻仔猪胃肠组织中的表达及意义

论文摘要

断奶仔猪腹泻是一种由多种因素引起的应激综合症,胃、肠黏膜屏障对抵御病原微生物的感染,维持消化道正常生理功能起着至关重要的作用。紧密连接（TJ）是胃肠黏膜屏障的重要组成部分,Claudins家族是形成TJ必不可少的部分。实验目的：研究断奶仔猪大肠杆菌性腹泻时胃肠道紧密连接蛋白Claudin-1的表达及意义。实验方法：建立断奶仔猪腹泻模型,用HE染色观察胃肠道组织学变化,采用免疫组化和实时荧光定量RT-PCR法检测Claudin-1在不同腹泻时期胃肠道的表达变化。实验结果：腹泻仔猪病理组织学变化主要表现为胃、肠上皮细胞脱落、变性并伴有浆液性渗出,肠绒毛扭曲、断裂、萎缩,细胞间质增厚,杯状细胞增生,固有层炎性细胞浸润。与正常组相比,回肠Claudin-1蛋白表达在腹泻组第一天（P<0.05）、第三天（P<0.01）均显著降低,结肠Claudin-1蛋白表达在腹泻组第三天明显下降（P<0.01）,胃Claudin-1蛋白表达微降,无明显差异,回肠Claudin-1mRNA的表达显著下降,特别是在腹泻第三天,在结肠组织Claudin-1mRNA的表达量也明显降低,但胃的差异不明显。结论：腹泻仔猪组织学变化随着时间发展炎症程度加重。断奶腹泻仔猪肠道Claudin-1表达水平下调可能与炎性细胞因子的调控有关,其它可能的调控途径有待进一步研究。Claudin-1表达的下调可作为肠黏膜屏障功能障碍的重要指标。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 缩略词表
• 第一章 文献综述
• 1 断奶仔猪腹泻研究现状简述
• 1.1 断奶仔猪腹泻的原因
• 1.1.1 断奶腹泻仔猪生理缺陷
• 1.1.2 营养性因素
• 1.1.3 感染性因素
• 1.1.4 环境性因素
• 1.2 断奶仔猪腹泻的综合防治措施
• 1.2.1 日粮的营养调控
• 1.2.2 猪舍的管理
• 1.2.3 疾病的防治
• 2 胃肠黏膜紧密连接蛋白Claudins
• 2.1 胃肠黏膜屏障
• 2.2 紧密连接（Tight Junction,TJ）
• 2.3 Claudins蛋白概述
• 2.4 Claudins蛋白与消化系统疾病
• 2.4.1 Claudins与食管疾病
• 2.4.2 Claudins与肝脏疾病
• 2.4.3 Claudins与胆管、胰腺疾病
• 2.4.4 Claudins与胃疾病
• 2.4.5 Claudins与肠道疾病
• 第二章 实验部分
• 1 材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 主要试剂
• 1.3 主要仪器
• 2 方法
• 2.1 大肠杆菌性腹泻模型制作
• 2.2 取材
• 2.3 病理组织学观察
• 2.3.1 石蜡切片的制作
• 2.3.2 HE染色
• 2.4 免疫组织化学检测
• 2.4.1 实验前准备
• 2.4.2 两步法染色步骤
• 2.4.3 数据统计与分析
• 2.5 基因水平的表达
• 2.5.1 引物设计
• 2.5.2 总RNA的提取
• 2.5.3 反转录扩增Claudin-1基因
• 2.5.4 荧光定量PCR反应
• 3 结果
• 3.1 断奶腹泻仔猪临床症状
• 3.2 断奶腹泻仔猪组织病理学结果
• 3.3 断奶腹泻仔猪胃、回肠、结肠Claudin-1蛋白免疫组织化学半定量检测结果
• 3.4 荧光定量PCR
• 3.4.1 PCR产物凝胶电泳和总RNA的鉴定
• 3.4.2 断奶腹泻仔猪胃肠道Claudin-1的表达结果
• 第三章 讨论与小结
• 1 讨论
• 1.1 断奶仔猪胃肠道组织学变化
• 1.1.1 产肠毒素大肠杆菌（ETEC）的影响
• 1.1.2 胃肠黏膜屏障结构的作用
• 1.2 断奶腹泻仔猪胃肠道Claudin-1的表达变化
• 2 小结
• 参考文献
• 致谢