H5N1亚型禽流感病毒RT-PCR及多重RT-PCR检测技术的研究

论文题目: H5N1亚型禽流感病毒RT-PCR及多重RT-PCR检测技术的研究

论文类型: 硕士论文

论文专业: 预防兽医学

作者: 张应国

导师: 段纲,胡永浩,张富强

关键词: 禽流感病毒,血凝素,神经氨酸酶,亚型特异性诊断,反转录聚合酶链反应

文献来源: 甘肃农业大学

发表年度: 2005

论文摘要: 高致病性禽流感(Highly pathogenic avian influenza,HPAI)是由A型流感病毒中的部分H5和H7亚型毒株引起,主要侵袭家禽,引起高发病率、高死亡率的烈性传染病,世界动物卫生组织(OIE)动物卫生法规将其列为A类动物疫病。2003年12月至2004年2月期间,南韩、越南、日本、柬埔寨、泰国、中国、印度尼西亚、老挝相继报道家禽暴发H5N1亚型高致病性禽流感。高致病性禽流感的暴发不仅给养禽业造成直接经济损失,而且影响贸易的发展。本文基于H5N1亚型流感病毒基质蛋白、血凝素、神经氨酸酶基因,研究建立了A型及H5、N1亚型特异性RT-PCR检测方法,用于检测A型及H5、N1亚型流感病毒。进而研究建立了H5/N1、A/H5/N1特异性多重RT-PCR检测方法,用于同时检测和鉴别H5、N1亚型或A型及H5、N1亚型流感病毒。从核酸提取到基因扩增、检测在4-5小时内完成。采用所建立的RT-PCR和多重RT-PCR,分析16株禽流感和新城疫的病毒分离物或临诊样品,其结果与传统病毒分离鉴定完全一致,具有高敏感性和高特异性,且与相关病毒(如新城疫病毒)或其它亚型(H9N2)无交叉反应。采用A/H5/N1特异性多重RT-PCR检测80份2004年采自昆明地区不同家禽的棉试子样品,并与病毒分离鉴定方法比较,研究发现二者H5N1亚型鉴定结果完全吻合。表明该方法具有具有快速、简便、经济、安全、敏感、特异等优点,可作为临诊样品中禽流感病毒型及H5N1亚型鉴定和诊断以及病毒分布流行病学调查的有效方法。

论文目录:

中文摘要

Summary

第一部分 文献综述

禽流感研究进展

1 禽流感概述

2 病原体

3 流行病学

3.1 发生史及分布

3.2 世界各国流行和危害情况

3.3 临床症状

3.4 病理变化

4 诊断

4.1 PCR诊断技术的研究进展

4.2 应用RT-PCR诊断禽流感的报道

第二部分 研究内容

1 前言

2 材料与方法

2.1 材料

2.1.1 病毒株

2.1.2 野外样品

2.1.3 试剂

2.1.4 仪器设备

2.2 引物设计

2.3 病毒RNA提取

2.4 A型特异性RT-PCR

2.5 H5亚型特异性RT-PCR

2.6 N1亚型特异性RT-PCR

2.7 H5/N1二重复合RT-PCR

2.8 A/H5/N1三重复合RT-PCR

2.9 野外样品检测

3 结果

3.1 A型特异性RT-PCR

3.2 H5亚型特异性RT-PCR

3.3 N1亚型特异性RT-PCR

3.4 H5/N1二重复合RT-PCR

3.5 A/H5/N1三重复合RT-PCR

3.6 野外样品检测

4 讨论

4.1 禽流感的诊断

4.2 MP及HA、NA亚型的鉴定

4.3 RT-PCR及多重RT-PCR技术

4.4 引物特异性和简并性

4.5 A型及H5、N1亚型特异性RT-PCR和多重RT-PCR

4.6 存在问题

5 结论

致谢

参考文献

作者简介

导师简介

发布时间: 2008-08-11

参考文献

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