论文摘要
背景与目的脑出血（intracerebral hemorrhage,ICH）是指原发性脑实质内出血,发病率高、死亡率高、致残率高,严重威胁人类的生命和健康。脑出血后血肿周围组织水肿和神经元损伤是影响脑出血患者病情程度及预后的重要因素。然而目前对脑出血尚无确切有效的治疗方法。其主要原因是对其病理生理机制认识尚不完全清楚。研究发现脑出血后血肿周围也存在一个类似于缺血性脑卒中的“半暗带”组织,“半暗带”组织中存在着复杂的病理生理变化,这种变化是多重因素共同参与的复杂的过程。进一步研究脑出血后血肿周围组织的病理生理机制并进行干预,对减少患者的功能损害、改善临床预后有重要意义。自由基及其相关的炎性机制在这些损害中的作用愈来愈受到重视。自由基清除剂MCI-186（3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮,依达拉奉）作为新开发的一种抗氧化剂已广泛用于治疗急性脑梗死,疗效显著。但其对出血性脑损伤是否具有治疗作用尚不清楚。本研究通过观察自由基和炎性反应在脑出血后脑损伤中的作用,以及依达拉奉对脑出血是否具有治疗效果,探讨其可能的机制,为脑出血后脑损伤的病理生理机制研究及临床治疗提供理论依据。材料和方法1.实验动物分组:Sprague-Dawley实验大鼠120只,雌雄各半,按照随机数字表法分为对照组（Control group）、脑出血组（ICH group）和治疗组（Therapy group）,每组40只。每组按不同的时相点又分为4个亚组,每个亚组10只。其中5只用于脑含水量和病理学检测,另外5只用于MDA、TNF-α、NF-κB检测。各组大鼠在取脑前从下腔静脉采集血标本,检测血浆中相应的指标。2. ICH动物模型:采用立体定向自体血注入法。沿正中线切开头部皮肤,暴露颅骨和Bregma点（前囟）。于前囟前0.2mm,中线右侧旁开3mm处垂直进针6mm到达尾状核,分两次注入50ul自体血。3.对照组大鼠操作步骤同ICH组,但不注血。治疗组大鼠分别于造模前30min及造模后1次/12h腹腔注射依达拉奉（3mg/Kg）;ICH组和对照组大鼠腹腔注射等量生理盐水。4.神经功能缺损评分:参照Longa（1989）标准。5.脑含水量检测:采用干湿重法。计算公式:脑含水量=（湿重-干重）/湿重×100%。6. MDA检测:采用硫代巴比妥酸法,单位:nmol/mgprot。7. TNF-α检测:采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法,单位:ng/ml。8. NF-κB检测:采用电泳迁移率变动分析（EMSA）法,单位:DU。9.病理学分析:采用苏木精-伊红染色（HE）,光镜下观察。10.统计学分析:应用SPSS10.0统计软件进行单因素方差分析及相关检验。结果1.神经功能缺损评分:脑出血组大鼠各时相点神经功能缺损评分明显高于对照组;治疗组大鼠各时相点神经功能缺损评分均显著低于脑出血组（P<0.05）。2.脑含水量检测:脑出血组大鼠6h、24h、72h脑含水量较对照组显著增高（P<0.05）,168h差异不显著（P>0.05）;与脑出血组相比,治疗组大鼠6h、24h、72h脑含水量显著降低（P<0.05）,168h差异不显著（P>0.05）。3.脑匀浆MDA、TNF-α含量检测:脑出血组大鼠各个时相点脑匀浆MDA、TNF-α含量较对照组显著升高（P<0.05）;与脑出血组相比,治疗组大鼠脑匀浆MDA、TNF-α含量显著降低（P<0.05）。4.相关性检验结果:脑出血组和治疗组大鼠脑含水量与脑匀浆TNF-α含量呈显著正相关,相关系数R2=0.934,p<0.01。5.脑组织NF-κB活性检测:脑出血组大鼠各个时相点脑组织NF-κB活性较对照组非常显著增高（p<0.01）;与脑出血组相比,治疗组大鼠各个时相点脑组织NF-κB活性非常显著降低（p<0.01）。6.血浆MDA、TNF-α含量检测:脑出血组各个时相点血浆MDA、TNF-α含量较对照组均非常显著增高（p<0.01）;与脑出血组相比,治疗组大鼠血浆MDA、TNF-α含量非常显著降低（P<0.01）。7.脑组织病理变化:HE染色光镜下见脑出血组大鼠血肿周围组织炎性细胞浸润及水肿情况比对照组均严重;与脑出血组相比,治疗组大鼠上述情况明显缓解。结论1.脑出血后自由基的大量产生、TNF-α的过量释放与血肿周围组织水肿、神经元损伤病生机制密切相关。2.脑出血后自由基大量产生,可进一步导致NF-κB活化,其下游的TNF-α过量释放。证实脑出血大鼠炎性机制与自由基的大量释放有关。3.依达拉奉对脑出血后神经组织有确切的保护作用。其机制可能与清除自由基,对抗脂质过氧化,以及间接抑制炎症反应有关。