猪链球菌2型39KD细胞壁蛋白的黏附作用

论文摘要

猪链球菌2型（Streptococcus suis type 2, SS2）是重要的人畜共患病病原体,主要感染人和仔猪,典型症状是脑膜炎、肺炎、败血症及突发性死亡。SS2细胞壁蛋白质有30余种,39KD细胞壁蛋白是其中之一。本试验对39KD细胞壁蛋白的黏附作用和细胞毒性作用分别进行研究。试验包括:第一,提取SS2的胞壁蛋白,利用分子筛层析法纯化39KD细胞壁蛋白至电泳纯;第二,膜上细胞黏附筛选试验和细胞黏附抑制试验。将胞壁蛋白进行SDS-PAGE电泳,并电转移至PVDF膜,用生物素标记的HEp-2细胞与PVDF膜上的蛋白条带进行黏附,用亲和素-HRP-DAB显色,得39KD阳性带。为进一步证实39KD细胞壁蛋白的黏附功能,将5μg/mL 39KD细胞壁蛋白与HEp-2细胞37℃,孵育2h,再加入SS2菌悬液（1×108CFU/mL） 37℃孵育2h,进行了黏附抑制试验,结果SS2对HEp-2细胞的黏附水平显著降低,提示39KD细胞壁蛋白可以部分阻断SS2对HEp-2细胞的黏附。第三,39KD细胞壁蛋白的细胞毒性试验。将5μg/mL 39KD细胞壁蛋白与HEp-2细胞37℃,孵育12 h,光学显微镜观察,39KD细胞壁蛋白作用后细胞的形态结构均正常,未见明显变化。结论:39KD细胞壁蛋白只有黏附作用,没有毒性作用,是SS2的黏附素。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一部分 试验研究 猪链球菌2 型39KD 细胞壁蛋白的黏附作用
• 试验一 39KD 细胞壁蛋白的分离纯化
• 1. 材料与方法
• 1.1 菌株
• 1.2. 细菌培养
• 1.3. SS2 胞壁总蛋白的提取.
• 1.4. SDS-PAGE 蛋白电泳
• 1.5. 39KD 细胞壁蛋白质的纯化
• 1.6. Sephadex G - 100 分子筛层析
• 1.7. 中高压层析系统的使用
• 2. 结果
• 2.1. SS2 胞壁总蛋白的提取
• 2.2. 39KD 细胞壁蛋白的纯化
• 试验二 39KD 细胞壁蛋白的黏附作用和细胞毒性试验
• 1. 材料与方法
• 1.1. 细胞培养
• 1.2. HEp-2 细胞的标记
• 1.3. SS2细胞壁蛋白中黏附素的筛选
• 1.4. 黏附抑制试验
• 1.5. 39KD 细胞壁蛋白的细胞毒性试验
• 2. 结果
• 2.1. SS2细胞壁蛋白中黏附素的筛选
• 2.2. 黏附抑制试验
• 2.3. 39KD细胞壁蛋白的细胞毒性实验
• 讨论
• 1. SS2 胞壁总蛋白的提取
• 2. 39KD 细胞壁蛋白的纯化
• 3. SS2细胞壁蛋白中黏附素的筛选
• 4. 黏附抑制实验
• 5. 39KD 细胞壁蛋白的细胞毒性实验
• 总结
• 参考文献
• 第二部分 文献综述
• 第一章 猪链球菌2 型研究进展
• 1. 病原学
• 2. 流行病学
• 3. 临场症状
• 4. 猪链球菌毒力因子研究进展
• 5. 致病机理
• 6. 猪链球菌诊断与鉴定
• 7. 猪链球菌病的防控
• 8. 结束语
• 参考文献
• 第二章 细菌黏附研究进展
• 1. 黏附素
• 2. 受体
• 3. 细菌黏附的过程
• 4. 影响细菌黏附的因素
• 5. 黏附素与免疫预防
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介
• 导师简介