论文题目: 色素上皮细胞衍生因子的实验研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 生物化学与分子生物学
作者: 杨楠
导师: 杨翰仪
关键词: 色素上皮细胞衍生因子,克隆表达,新生血管抑制因子,微囊,血管内皮细胞
文献来源: 吉林大学
发表年度: 2005
论文摘要: 色素上皮细胞衍生因子(Pigment epithelium-derived factor, PEDF)是近年来发现的最有效的内源性新生血管抑制因子。它只作用于活化的血管内皮细胞,具有高效性、特异性及安全性等特点。由于胚胎来源受限,国外学者通过DNA 体外重组技术克隆表达PEDF,并对其进行的研究相对于其它抑制因子还不是很多,国内学者在这方面的研究就更少。鉴于此,我们在国内首次通过从胚胎中钓取PEDF 的总RNA,采用RT-PCR 技术,得到PEDF 的全基因序列,通过双酶切(EcoRI/SalI),采用现今最有效的原核表达系统--pET28a 原核表达载体,构建了pET28a/PEDF 原核表达重组体,并转化至原核表达宿主菌大肠杆菌BL21 中克隆、表达,并通过一步法的Ni2+螯合层析对表达的重组人PEDF 进行了纯化,得到的可溶性重组人PEDF 的纯度在90%以上。通过体内及体外实验,在细胞水平观察了克隆表达的重组人PEDF 对人血管内皮细胞增殖及迁移的作用;在活体水平观察了重组人PEDF 对鸡胚绒毛尿囊膜新生血管及兔角膜碱烧伤后新生血管的作用。实验结果证明,我们克隆表达的重组人PEDF 对人血管内皮细胞增殖及迁移、鸡胚绒毛尿囊膜及兔角膜碱烧伤后新生血管均有显著抑制作用,并呈量效关系。其作用靶位点为活化的新生血管的内皮细胞。我们利用中科院大连化学物理研究所生物医学材料工程组的先进技术对PEDF 应用剂型进行了研究,制备了直径在300-400μm 之间的注射型重组人PEDF 微囊,构建了重组人PEDF 的缓释
论文目录:
第一章文献综述
第一节内源性血管生长抑制因子研究进展
第二节色素上皮细胞衍生因子研究进展
第三节 微囊技术在多肽药物上的应用进展
第二章重组人色素上皮细胞衍生因子克隆表达及纯化
前言
实验一重组人色素上皮细胞衍生因子原核表达重组体的构建
材料和方法
结果
讨论
实验二重组人 PEDF 的原核表达及纯化
材料和方法
结果
讨论
小结
第三章 重组人 PEDF 对血管生成抑制作用的实验研究
前言
实验一重组人 PEDF 对体外培养的血管内皮细胞增殖、迁移作用的实验研究
材料和方法
结果
讨论
实验二重组人 PEDF 抑制鸡胚绒毛尿囊膜新生血管生成的实验研究
材料和方法
结果
实验三重组人 PEDF 抑制兔角膜碱烧伤后新生血管生成的实验研究
材料和方法
结果
讨论
小结
第四章 注射型重组人 PEDF微囊抑血管作用的实验研究
前言
实验一注射型重组人PEDF 微囊的制备
材料和方法
结果
讨论
实验二注射型重组人PEDF 微囊对鸡胚尿囊膜血管及小鼠黑色素瘤抑制作用的实验研究
材料和方法
结果
讨论
小结
全文总结
附图
参考文献
攻读博士期间发表论文
中文摘要
Abstract
致谢
导师简介
发布时间: 2005-08-26
参考文献
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标签：色素上皮细胞衍生因子论文; 克隆表达论文; 新生血管抑制因子论文; 微囊论文; 血管内皮细胞论文;