论文摘要
目的：黄曲霉毒素B1（AFB1）是一种具有强致癌性、致畸性和遗传毒性的物质，本研究所已经分离出一种产黄曲霉素解毒酶（ADTZ）的真菌E20，并对其进行基因克隆和重组表达，得到了重组黄曲霉毒素解毒酶（rADTZ）。前期的研究工作推断ADTZ催化AFB1是先氧化后水解生成无毒产物，氧化是一个重要的启动过程。本研究通过电化学方法探讨ADTZ催化AFB1的途径和酶的性质。方法：采用疏水层析（HIC）纯化ADTZ、DEAE纯化rADTZ，制备较高纯度和比活力的ADTZ及rADTZ。活化MWNT、SWNT使之带上-COOH，以共价交联的方式制备ADTZ/MWNT修饰电极及rADTZ/SWNT修饰电极，利用电化学分析技术-循环伏安法（CV）、微分脉冲伏安法（DPV），对黄曲霉毒素（AFB1）、杂色曲霉素（ST）、杂色曲霉素（VA）、二氢吡喃（DHP）、四氢呋喃（THF）、苯并呋喃（BF）及8-甲氧基补骨脂素（8-MOP）进行检测并分析其电信号。利用辣根过氧化物酶分析电极检测ADTZ催化体系中是否产生了H2O2，并通过往分析体系中通O2或通N2的电化学变化，探讨O2对ADTZ催化体系的影响。结果与结论：（1）rADTZ-SWNT修饰电极对AFB1、ST、VA、DHP、THF、8-MOP及BF进行检测，对AFB1、ST、VA、DHP、THF检测到了信号，对8-MOP及BF未能检测到信号，可能由于呋喃环紧挨苯环导致不易失电子，反应难以进行；（2）用纳米管固定辣根过氧化物酶，检测到了rADTZ催化AFB1、DHP、THF的过程中产生了过氧化氢；（3）氧气能加强rADTZ催化AFB1的氧化还原电信号；（4）实验结果表明rADTZ催化反应存在氧化还原过程，反应中产生了H2O2，氧对催化反应有加强作用，提示ADTZ为一种单加氧酶。
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摘要Abstract第一章 前言1.1 黄曲霉毒素及黄曲霉毒素解毒酶的简介1.1.1 黄曲霉毒素的简介1.1.2 黄曲霉毒素解毒酶的介绍1.2 生物传感器在酶反应机制研究中的应用1.3 课题意义和设计方案第二章 实验设备与材料2.1 主要实验设备2.2 实验材料2.3 主要溶液配制2.3.1 培养产ADTZ的E20菌种培养基配制2.3.2 提取纯化ADTZ和rADTZ溶液配制2.3.3.蛋白定量分析溶液配制2.3.4.SDS-PAGE不连续电泳2.3.5 电分析化学主要试剂的配制第三章 实验方法第一部分 分析电极的制备与评价3.1 酶的分离与纯化3.2 碳纳米管的羧化与组装电极3.3 酶分析电极的制备第二部分 ADTZ催化不同底物在酶分析电极上的电化学特征1在酶分析电极上的电化学特征'>3.4 AFB1在酶分析电极上的电化学特征3.5 杂色曲霉素（ST）在酶分析电极上的电化学特征3.6 杂色曲菌素（VA）在酶分析电极上的电化学特征3.7 二氢吡喃（DHP）在酶分析电极上的电化学特征3.8 四氢呋喃（THF）在酶分析电极上的电化学特征3.9 苯并呋喃（BF）在酶分析电极上的电化学特征3.10 8-甲氧基补骨脂素（8-MOP）在酶分析电极上的电化学特征第四章 实验结果第一部分 分析电极的制备与评价4.1.酶的分离与纯化4.2 碳纳米管的羧化与组装电极4.3.酶分析电极的制备第二部分 ADTZ催化不同底物在酶分析电极上的电化学特征1在酶分析电极上的电化学特征'> 4.4 AFB1在酶分析电极上的电化学特征1在ADTZ酶修饰电极上的电化学特征'>4.4.1 AFB1在ADTZ酶修饰电极上的电化学特征1在HRP-SWNT修饰电极上的电化学特征'>4.4.2 AFB1在HRP-SWNT修饰电极上的电化学特征4.5 杂色曲霉素（ST）在酶分析电极上的电化学特征4.5.1 rADTZ-SWNT修饰电极对ST溶液的电化学表征4.5.2 ST在HRP-SWNT修饰电极上的电化学特征4.6.杂色曲菌素（VA）在酶分析电极上的电化学特征4.6.1 rADTZ-SWNT修饰电极对VA溶液的电化学表征4.6.2 VA在HRP-SWNT修饰电极上的电化学特征4.7 二氢呋喃（DHP）在酶分析电极上的电化学特征4.7.1 rADTZ-SWNT修饰电极对DHP溶液的电化学表征4.7.2 DHP在HRP-SWNT修饰电极上的电化学特征4.8 四氢呋喃（THF）在酶分析电极上的电化学特征4.8.1 rADTZ-SWNT修饰电极对THF溶液的电化学表征4.8.2 THF在HRP-SWNT修饰电极上的电化学特征4.9 苯并呋喃（BF）在酶分析电极上的电化学特征4.9.1 rADTZ-SWNT修饰电极对BF溶液的电化学表征4.10 8-甲氧基补骨脂素（8-MOP）在酶分析电极上的电化学特征4.11 小结第五章 讨论5.1 酶的分离与纯化5.2 利用碳纳米管改善生物分子的氧化还原可逆性5.3 利用碳纳米管固定蛋白质5.4 NHS-EDC桥共价交联固定蛋白5.5 HRP-SWNT修饰电极对VA的催化机理1的可能机理的推测'>5.6 rADTZ催化AFB1的可能机理的推测结论与展望附录1 英文缩略词附录2 电化学分析中参数设置参考文献致谢
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