论文摘要
神经甾体硫化孕烯醇酮对大鼠前额叶皮层内侧区中间神经元兴奋性突触传入的作用和机制前额叶皮层内侧区是一个非常重要的脑区,很多实验已经证明前额叶皮层内侧区在认知、思维、记忆等高级脑功能活动中起着关键作用。前额叶皮层内侧区的中间神经元是该脑区功能的调控者,它不仅参与了上述高级认知功能的生理过程而且还涉及其病理机制,因此对中间神经元的功能调节很可能影响认知、思维、记忆等高级脑功能活动,另外也有可能在神经精神疾病以及兴奋性精神药物的成瘾等疾病的发病过程中起调节作用。神经甾体是脑中重要的活性分子,对脑功能具有重要作用,在神经系统疾病中也具有重要作用。在神经甾体家族中,硫化孕烯醇酮（Pregnenolone sulfate,PREGS）的含量最丰富,活性最强。我们实验室的最新研究表明,PREGS酮对前额叶皮层内侧区锥体细胞的突触前的谷氨酸传入有显著作用。然而,PREGS对前额叶皮层内侧区中间神经元突触前的谷氨酸传入是否有作用,如果有作用那么对中间神经和锥体细胞的突触前作用相似还是不同,最终对动作电位产生的影响相似还是不同。为回答这些问题,本课题采用脑片全细胞膜片钳方法记录前额叶皮层内侧区中间神经微小兴奋性突触后电流（mEPSCs）,首先研究PREGS对前额叶皮层内侧区中间神经元突触前的谷氨酸传入作用,分析其作用的受体机制及信号通路,并且进一步比较其与锥体细胞作用机制的差异;然后研究PREGS对中间神经元自发兴奋性突触后电流（sEPSCs）以及电刺激诱发兴奋性突触后电流（eEPSCs）的作用;最后研究这些兴奋性电流的变化对中间神经元动作电位的影响。结果表明PREGS能够明显增加前额叶皮层中间神经元mEPSCs的频率,这个作用同对锥体细胞的作用相同,不同的是对于中间神经元σ1受体拮抗剂能完全阻断PREGS的作用,而α1受体拮抗剂却没有作用;并且σ1受体激动剂能完全模拟PREGS的作用,而α1受体激动剂不能模拟PREGS的作用,也不能影响σ1受体激动剂的作用。而对于锥体细胞对σ1受体拮抗剂部分阻断PREGS的作用,而α1受体拮抗剂完全阻断PREGS的作用;并且α1受体激动剂能部分模拟PREGS的作用,σ1受体激动剂不能模拟PREGS的作用,α1受体激动剂和σ1受体激动剂联合作用能模拟PREGS的作用。PREGS的作用可被PKC拮抗剂完全阻断,而PKA拮抗剂没有阻断作用。以上结果说明PREGS增加中间神经元mEPSCs频率是通过σ1受体而非α1受体起作用的,细胞内途径是通过PKC而非PKA环节进行信号转导的。另外还发现PREGS作用于中间神经元,增加sEPSCs的频率和eEPSC的幅度。对中间神经元和锥体细胞动作电位的潜伏期比较研究显示,PREGS缩短了中间神经元动作电位产生的潜伏期,而延长了锥体细胞的潜伏期。
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中文摘要英文摘要前言材料与方法一、溶液的配制（一） 人工脑脊液配制（二） 电极内液配制二、微电极拉制三、全细胞记录（一） 脑片制备（二） 脑片放置（三） 微电极使用（四） 定位和细胞选取（五） 吉欧（GΩ）封接（六） 吸破细胞膜（七） 全细胞记录四、组织学染色鉴定五、仪器和试剂（一） 仪器及器材（二） 试剂和给药六、数据分析与统计实验结果第一部分 PREGS对中间神经元mEPSCs的作用和及机制一、PREGS对中间神经元mEPSCs的作用（一） 20μM PREGS显著增加中间神经元mEPSCs的频率（二） PREGS对mEPSCs频率作用的量效关系二、PREGS增加中间神经元mEPSCs频率作用的机制（一） PREGS作用的受体机制1受体拮抗剂haloperidol完全阻断PREGS的作用'>1.σ1受体拮抗剂haloperidol完全阻断PREGS的作用1受体拮抗剂AC915完全阻断PREGS的作用'>2.σ1受体拮抗剂AC915完全阻断PREGS的作用1受体激动剂carbetapentane能模拟PREGS的作用'>3.σ1受体激动剂carbetapentane能模拟PREGS的作用1受体拮抗剂prazosin不能阻断PREGS的作用'>4.α1受体拮抗剂prazosin不能阻断PREGS的作用1受体激动剂PE不能模拟PREGS的作用'>5.α1受体激动剂PE不能模拟PREGS的作用1受体激动剂不影响σ1受体激动剂的作用'>6.α1受体激动剂不影响σ1受体激动剂的作用（二） PREGS作用的细胞内信号转导途径1.PKC拮抗剂chelerythrine完全抑制PREGS引起mEPSCs频率的增加2.PKA拮抗剂H89对PREGS引起mEPSCs频率的增加作用没有影响三、PREGS对中间神经元和锥体细胞作用机制的比较（一） 20μM PREGS增加锥体细胞mEPSCs的频率（二） 比较PREGS对锥体细胞与中间神经元作用的受体机制1受体拮抗剂haloperidol部分阻断PREGS对锥体细胞的作用'>1.σ1受体拮抗剂haloperidol部分阻断PREGS对锥体细胞的作用1受体激动剂carbetapentane不能模拟PREGS对锥体细胞的作用'>2.σ1受体激动剂carbetapentane不能模拟PREGS对锥体细胞的作用1受体拮抗剂parzosin完全阻断PREGS对锥体细胞的作用'>3.α1受体拮抗剂parzosin完全阻断PREGS对锥体细胞的作用1受体激动剂PE能模拟PREGS对锥体细胞的作用'>4.α1受体激动剂PE能模拟PREGS对锥体细胞的作用1受体激动剂PE联合σ1受体激动剂carbetapentane能完全模拟PREGS对锥体细胞的作用'>5.α1受体激动剂PE联合σ1受体激动剂carbetapentane能完全模拟PREGS对锥体细胞的作用第二部分 PREGS对中间神经元sEPSCs、eEPSC、PPF和动作电位潜伏期的作用一、PREGS增加中间神经元sEPSC的频率二、PREGS增加中间神经元电刺激诱发eEPSC的幅度三、PREGS抑制中间神经元双脉冲增强效应四、PREGS对动作电位潜伏期的影响附图讨论结论参考文献综述在学期间完成和发表的著作、论文及会议摘要致谢
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神经甾体硫化孕烯醇酮对大鼠前额叶皮层内侧区中间神经元兴奋性突触传入的作用和机制
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