Enterocin A结构基因的克隆、功能性表达及构效关系研究

论文题目: Enterocin A结构基因的克隆、功能性表达及构效关系研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 预防兽医学

作者: 赵爱珍

导师: 韩文瑜

关键词: 屎肠球菌,抑菌活性,基因克隆,序列分析,异源表达,融合蛋白,突变体

文献来源: 吉林大学

发表年度: 2005

论文摘要: 联合应用表型测定和PCR 技术判定屎肠球菌AS1.2025 具有产生enterocin A 的能力,并从其染色体DNA 中克隆到包含结构基因在内的三种enterocin A 合成相关基因。成功构建了三种enterocin A 重组表达质粒,表达的MBP-enterocin A、GST-enterocin A 及His-tag-enterocin A 呈现抗李斯特氏菌活性。进行了MBP-enterocin A 和His-tag-enterocin A 的抑菌谱、稳定性及作用模式的研究,结果表明,环境因素如温度和pH 值及化学物质如蛋白酶和还原剂均不同程度影响重组enterocin A 的活性;重组enterocin A 表现特异的抗李斯特氏菌活性和杀菌的作用模式。通过PCR 突变技术成功构建了5种MBP-enterocin A突变体重组表达质粒,并对MBP-enterocin A及其突变体的抑菌活性进行比较分析,结果表明:二硫键为重组enterocin A 活性的关键因素,而亮氨酸不为活性的关键氨基酸;enterocin A 的N-端氨基酸序列为活性的关键因素,并也表明了enterocin A 前体也具有活性。

论文目录:

前言

第一篇 文献综述

第一章 生物抗菌肽的研究进展

第二章 乳酸菌的细菌素

第三章 生物防腐剂在食品中的应用

第二篇 研究内容

第一章 屎肠球菌AS 1.2025 产生Enterocin 能力的表型及基因检测

1 材料和方法

2 结果

2.1 屎肠球菌AS 1.2025 株的生物学特性

2.2 屎肠球菌AS 1.2025 的生长曲线

2.3 屎肠球菌AS 1.2025 的拮抗活性

2.4 两种培养物上清液制备组分的细菌素活性

2.5 Enterocin 基因的PCR 检测及序列测定

3 讨论

4 小结

第二章 Enterocin A 生物合成相关基因的克隆与序列特征分析

1 材料和方法

2 结果

2.1 重组质粒pGAIF 的正确构建

2.2 entAIF 的序列特征

2.2 推导enterocin A 及免疫蛋白的结构预测

3 讨论

4 小结

第三章 功能性Enterocin A 在大肠杆菌中的表达

1 材料和方法

2 结果

2.1 Enterocin A 重组表达质粒的正确构建

2.2 表达产物的SDS-PAGE 分析结果

2.3 重组enterocin A的功能性测定结果

3 讨论

4 小结

第四章 重组Enterocin A 的生物学活性研究

1 材料和方法

2 结果

2.1 重组enterocin A 的纯化结果

2.2 重组enterocin A 的活性及抑菌谱测定结果

2.3 外界因素对重组enterocin A 活性的影响结果

2.4 重组enterocin A的作用模式

3 讨论

4 小结

第五章 Enterocin A 的构效关系研究

1 材料和方法

2 结果

2.1 MBP-enterocin A 突变体表达质粒的正确构建

2.2 表达产物的SDS-PAGE分析结果

2.3 MBP-enterocin A 及其突变体的抑菌活性比较结果

3 讨论

4 小结

结论

参考文献

中文摘要

英文摘要

攻博期间发表的学术论文及其他成果

致谢

导师及作者简介

发布时间: 2005-08-26

参考文献

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