论文摘要
一支箭根部经匀浆、浸取、硫酸铵分级沉淀、阴离子交换柱（DEAE—Sepharose）和Sephacryl S—100分子筛层析得到经过SDS—PAGE检测为单一条带的一支箭凝集素（Ophioglossum pedunculosum DesvAgglutinin,OPA）纯品。其表观分子量为19．1kDa，亚基分子量为19．1kDa，表明OPA是分子量约为19．1kDa的单体蛋白。凝血活性结果表明，OPA能凝集天然兔血细胞，其凝集兔血细胞效价为1．9μg/ml。OPA还能凝集人O型血细胞，但对人A、B型血均不凝集。糖抑制实验表明，甲状腺球蛋白及甘露聚糖能够强烈抑制其活性。研究了不同温度、pH和变性剂对OPA凝血活性和荧光光谱的变化，凝血活性在40℃以下保持相对的稳定性，高于50℃，凝血活性逐步丧失，当温度达90℃时，OPA活性大部分丧失，100℃仍有20％的活性；pH为4—9时OPA活性相当稳定，最适pH为8；当pH为11时，大部分凝血活性丢失，而pH为2时仍保留50％的活性。表明OPA对高温，对酸性环境表现出较强的耐受性。295nm激发时，天然OPA的最大荧光发射峰在328nm处，比游离Trp的最大荧光发射峰348nm蓝移了20nm，说明Trp周围的极性较弱，位于相对疏水区，并未完全暴露于周围溶剂中。280nm激发时，其最大荧光发射峰在340nm处，荧光强度增加，说明OPA的内源荧光发生了从TVr到Trp的能量转移。研究了氯化铯，碘化钾，丙烯酰胺和琥珀酰亚胺对OPA的荧光粹灭作用，丙烯酰胺和琥珀酰亚胺对OPA中Trp淬灭程度达100％，KI淬灭约62．5％的Trp荧光，而氯化铯基本不能淬灭OPAL的荧光，表明几乎所有的色氨酸位于凝集素近分子表面相对疏水的浅沟或强阳离子区域。用荧光光谱法研究了变性剂脲，盐酸胍和SDS在不同浓度下对OPA构象，发现当浓度逐渐增加时，荧光强度急剧增强。脲、盐酸胍、SDS对凝集素凝血活性的影响表明，脲对OPA的活性没有太大的影响。而随着变性剂盐酸胍、SDS浓度的升高，凝血活性逐渐丧失。NBS修饰Trp过程中，荧光强度明显降低，最大发射波长开始没有明显变化，随着Trp不断被修饰，发射峰明显蓝移。计算表明大约有1个色氨酸残基位于OPA分子表面，对凝血活性有一定的影响。用2，3-butanedione修饰精氨酸结果表明，对其修饰后导致凝血活性丧失70％，精氨酸修饰在维持凝血活性中心或分子构象中起着一定的作用。用DEPC修饰组氨酸以及用NBSF修饰酪氨酸，修饰后OPA凝血活性均没有变化，表明这些残基不位于糖结合活性位点或凝血活性中心。通过抑菌试验，表明一支箭凝集素对玉米絮孢，小麦赤霉等真菌的生长都有抑制作用，最低的抑制浓度分别为20μg/ml和17．5μg/ml，但是不影响棉花枯萎等真菌的生长。
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