论文摘要
黄芩作为我国传统中药药材之一,具有广泛的药理作用。黄芩活性成分已被广泛研究,其中黄酮类化合物成分的提取及应用的研究较全面,但为了高效利用黄芩资源,探索黄芩中新的活性成分,本文研究了黄芩中的活性蛋白提取分离方法：对黄芩的蛋白质成分进行了分离,得到了两个电泳纯的蛋白质组分,并分别对其进行了表征。经过硫酸铵分级沉淀和多步离子交换层析后,从黄芩抽提液得到了一个纯的蛋白组分,命名为Pro-1。该蛋白属于糖蛋白,总糖含量为14%,单链,分子内部存在一定的键内二硫键,SDS-PAGE确定蛋白分子量为62.23kDa, N端前8个氨基酸残基为GSAVGFLY。Pro-1具有凝集素活性,表现出选择性的凝集能力,可凝集人血红细胞和公鸡血红细胞,不能凝集小鼠及兔血红细胞。对Pro-1蛋白性质表征的结果显示,其凝集素活性的pH稳定范围大,在pH4.0-10.0范围内,凝集活性不受影响；凝集素活性热稳定性较差,高于60℃,凝集活性明显降低；Pro-1是一种金属依赖型凝集素,依赖Ca2+和Zn2+；Pro-1凝集素明显抑制番茄尖孢镰刀菌和水葫芦链格孢菌生长,对大肠杆菌及葡萄球菌无抑制能力。该蛋白的细胞实验结果表明：Pro-1蛋白具有促进正常肝细胞L02增殖作用,但对MDCK无增殖作用：Pro-1蛋白还显示出较强的抑制肝癌细胞HepG2的增殖作用,最大抑制率为83.43%。通过两步离子交换层析,纯化得到的另一个电泳纯的蛋白质组分,命名为Pro-2。Pro-2为单链蛋白,分子内部含键内二硫键,分子量为33.8 kDa,总糖含量为16.2%。Pro-2中丝氨酸含量最高,含量为14.6%,酪氨酸和胱氨酸含量都很低。Pro-2蛋白对正常肝细胞L02的生长具有促进作用,最大抑制率达84.23%；在浓度范围1.72-110μg/ml内,该蛋白对正常狗肾上皮细胞MDCK毒性较大；该蛋白仅能轻微抑制肝癌细胞HepG2的增殖,最高为17.15%,效果不明显。