论文摘要
目的研究不同剂量雷帕霉素对小鼠体内Treg细胞的影响;探讨不同剂量雷帕霉素对Foxp3基因表达及mTOR活化的影响,进一步分析Foxp3基因表达程度与PI3K-AKT-mTOR信号通路的激活程度是否具有相关性,为探索RAPA诱导Foxp3基因表达的具体机制提供一条新的思路。方法将SPF级昆明系小鼠60只随机分为对照组（A）和实验组（B、C、D）, B、C、D三组分别灌胃雷帕霉素0.2mg·d-1、0.4 mg·d-1、0.6 mg·d-1,A组每天予以无菌水灌胃,共3周。3周后,无菌条件下心脏采血, EDTA抗凝,分离脾脏,制备单细胞悬液,采用流式细胞仪检测小鼠外周血和脾脏中CD4+CD25+调节性T细胞水平（CD4+CD25+Treg细胞占CD4+T细胞的百分比）,RT-PCR检测小鼠脾细胞Foxp3mRNA的表达,免疫组织化学SP法染色观察小鼠脾脏中p-mTOR蛋白表达的变化,并利用计算机图像分析技术测量各实验组及对照组中p-mTOR蛋白表达的平均光密度。结果1实验组（B、C、D）小鼠外周血和脾细胞中CD4+CD25+Treg细胞水平分别为（9.62±1.43、13.76±1.97、15.41±2.45） %和（12.23±4.56、23.03±6.18、25.17±6.42） % ,对照组（A）小鼠外周血和脾细胞中CD4+CD25+Treg细胞水平分别为（3.52±0.65） %和（6.53±3.01） % ,无论是在外周血还是脾细胞中, B、C、D组CD4+CD25+Treg细胞水平明显高于A组（ P< 0.05）,C、D组与B组之间CD4+CD25+Treg细胞水平也有明显差异性（ P< 0.05）,C组和D组之间CD4+CD25+Treg细胞水平无明显差异性（ P>0.05）。2 Foxp3mRNA在实验组（B、C、D）小鼠脾脏中表达的程度分别为（0.4853±0.0574、0.7886±0.1085、0.9639±0.2015）,明显高于对照组A（0.1345±0.0271）（ P< 0.05）;实验组（B、C、D）小鼠脾脏中p-mTOR蛋白表达的平均光密度分别为（0.2326±0.0431、0.1156±0.0223、0.0556±0.0041）,明显低于对照组A（0.4223±0.0534）（ P< 0.05）;两指标经pearson相关分析,小鼠脾脏中Foxp3mRNA的表达与p-mTOR蛋白表达呈负相关。结论1雷帕霉素能够诱导昆明系小鼠体内CD4+CD25+Treg细胞增殖,其使用剂量可以影响CD4+CD25+Treg细胞的增殖程度。2抑制PI3K-AKT-mTOR信号通路会促使Foxp3的表达增强;PI3K-AKT-mTOR信号通路的激活程度与Foxp3的表达程度呈负相关。