紫杉醇体外作用Tca8113最佳治疗浓度及诱导其凋亡作用的初步研究

论文摘要

目的每年全世界大约有50万新发的头颈部肿瘤患者，其中口腔肿瘤占50％左右，舌癌是其中最常见的恶性肿瘤。迄今为止，临床治疗上口腔鳞癌主要依靠外科手术、放化疗。尽管加强了一级预防，疾病筛查和治疗，但并未显著提高罹患者的长期生存率。因此从肿瘤生物学特点出发，探索新的、更有效的临床治疗方法是舌癌治疗学研究的重要方向。本文运用体外实验初步筛选出化疗药紫杉醇分别在24h、48h、72h时段内杀灭人舌鳞癌Tca8113细胞的最佳浓度，同时观察紫杉醇对人舌鳞癌Tca8113细胞系增殖与凋亡进程的影响，并进一步探讨其作用机制，以及在这个过程中hTERT基因表达水平的变化趋势及其调控机制，作为舌癌治疗和预后的依据。材料和方法（1）将紫杉醇制成不同浓度的系列溶液，分别加入人舌鳞癌Tca8113细胞系与人胚肺成纤维HLF细胞系。分别于24h、48h、72h后，通过MTT法获得不同浓度紫杉醇对两个细胞系的作用效果，从而筛选出不同时段紫杉醇杀灭癌细胞的最佳浓度；（2）0.01μg／ml紫杉醇体外作用于人舌鳞癌Tca8113细胞系24h，48h，72h后，应用倒置光学显微镜观察Tca8113细胞形态学变化、DNA提取琼脂糖凝胶电泳检测DNA ladder、流式细胞术检测凋亡率及Tca8113细胞的周期变化以及应用RT-PCR检测人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因的表达情况，进一步探讨紫杉醇对Tca8113细胞系凋亡的影响及其作用机制，以及在这个过程中hTERT基因表达的调控机制。结果紫杉醇体外作用于人舌鳞癌Tca8113细胞系24h，48h，72h后，其各自作用的最佳浓度分别为0.1μg／ml、0.01／μg／ml、0.005μg／ml。紫杉醇能够显著抑制Tca8113细胞增殖，诱导细胞凋亡，0.01μg／ml紫杉醇组在24h、48h、72h凋亡率分别为8.12％、13.43％、20.1％，其凋亡程度与时间呈正相关。0.01μg／ml紫杉醇作用72h以后，Tca8113细胞G2／M期阻滞，紫杉醇能抑制hTERTmRNA的表达，随紫杉醇作用时间的增加，细胞hTERTmRNA表达逐渐减弱。结论（1）紫杉醇体外作用于人舌鳞癌Tca8113细胞系24h，48h，72h后，其各自作用的最佳浓度分别为0.1μg／ml、0.01μg／ml、0.005μg／ml。在相应浓度下，紫杉醇对癌细胞有较大杀伤性而对正常细胞几乎没有破坏。0.01μg／ml紫杉醇体外作用于人舌鳞癌Tca8113细胞系24h，48h，72h，明显抑制其增殖，且作用随时间增加而不断增强，呈时间依赖性。（2）紫杉醇抑制Tca8113细胞增殖与其诱导细胞凋亡作用有关。（3）紫杉醇作用Tca8113细胞72h后，细胞G2／M期阻滞。（4）紫杉醇诱导下Tca8113细胞系凋亡随作用时间延长持续增加，伴随hTERT基因表达的不断降低。提示诱导细胞凋亡和抑制hTERT表达可能是其抑癌作用机制之一。

论文目录

• 缩略语表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一部分
• 前言
• 材料方法
• 结果
• 讨论
• 第二部分
• 前言
• 材料方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 附图
• 参考文献
• 致谢
• 综述