论文摘要
目的每年全世界大约有50万新发的头颈部肿瘤患者,其中口腔肿瘤占50%左右,舌癌是其中最常见的恶性肿瘤。迄今为止,临床治疗上口腔鳞癌主要依靠外科手术、放化疗。尽管加强了一级预防,疾病筛查和治疗,但并未显著提高罹患者的长期生存率。因此从肿瘤生物学特点出发,探索新的、更有效的临床治疗方法是舌癌治疗学研究的重要方向。本文运用体外实验初步筛选出化疗药紫杉醇分别在24h、48h、72h时段内杀灭人舌鳞癌Tca8113细胞的最佳浓度,同时观察紫杉醇对人舌鳞癌Tca8113细胞系增殖与凋亡进程的影响,并进一步探讨其作用机制,以及在这个过程中hTERT基因表达水平的变化趋势及其调控机制,作为舌癌治疗和预后的依据。材料和方法(1)将紫杉醇制成不同浓度的系列溶液,分别加入人舌鳞癌Tca8113细胞系与人胚肺成纤维HLF细胞系。分别于24h、48h、72h后,通过MTT法获得不同浓度紫杉醇对两个细胞系的作用效果,从而筛选出不同时段紫杉醇杀灭癌细胞的最佳浓度;(2)0.01μg/ml紫杉醇体外作用于人舌鳞癌Tca8113细胞系24h,48h,72h后,应用倒置光学显微镜观察Tca8113细胞形态学变化、DNA提取琼脂糖凝胶电泳检测DNA ladder、流式细胞术检测凋亡率及Tca8113细胞的周期变化以及应用RT-PCR检测人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的表达情况,进一步探讨紫杉醇对Tca8113细胞系凋亡的影响及其作用机制,以及在这个过程中hTERT基因表达的调控机制。结果紫杉醇体外作用于人舌鳞癌Tca8113细胞系24h,48h,72h后,其各自作用的最佳浓度分别为0.1μg/ml、0.01/μg/ml、0.005μg/ml。紫杉醇能够显著抑制Tca8113细胞增殖,诱导细胞凋亡,0.01μg/ml紫杉醇组在24h、48h、72h凋亡率分别为8.12%、13.43%、20.1%,其凋亡程度与时间呈正相关。0.01μg/ml紫杉醇作用72h以后,Tca8113细胞G2/M期阻滞,紫杉醇能抑制hTERTmRNA的表达,随紫杉醇作用时间的增加,细胞hTERTmRNA表达逐渐减弱。结论(1)紫杉醇体外作用于人舌鳞癌Tca8113细胞系24h,48h,72h后,其各自作用的最佳浓度分别为0.1μg/ml、0.01μg/ml、0.005μg/ml。在相应浓度下,紫杉醇对癌细胞有较大杀伤性而对正常细胞几乎没有破坏。0.01μg/ml紫杉醇体外作用于人舌鳞癌Tca8113细胞系24h,48h,72h,明显抑制其增殖,且作用随时间增加而不断增强,呈时间依赖性。(2)紫杉醇抑制Tca8113细胞增殖与其诱导细胞凋亡作用有关。(3)紫杉醇作用Tca8113细胞72h后,细胞G2/M期阻滞。(4)紫杉醇诱导下Tca8113细胞系凋亡随作用时间延长持续增加,伴随hTERT基因表达的不断降低。提示诱导细胞凋亡和抑制hTERT表达可能是其抑癌作用机制之一。
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