IFN-γ、CD双顺反子表达载体的构建及在大肠杆菌中的高效表达

论文摘要

用基因重组方法将人γ-干扰素（IFN-γ）cDNA片段用EcoRI,Sal I插入到原核表达载体pGI中,将重组质粒pGIFN转化大肠杆菌JF1125,构建了IFN-γ原核表达工程菌。经温度诱导培养后,SDS-PAGE光密度扫描证实重组IFN-γ表达量占菌体总蛋白的58%以上。同时,通过PCR方法克隆出大肠杆菌HB101胞嘧啶脱氨酶（CD）基因,前端引入SD序列后构建原核表达载体pGCD,转化大肠杆菌JF1125后经温度诱导,SDS-PAGE显示重组CD表达量占菌体总蛋白的47%以上。在以上研究基础上,将IFN-γ cDNA片段插入pGCD质粒CD基因前的EcoR I、Sma I位点间,构建高效表达的双顺反子表达载体pGIFN-CD。经温度诱导该系统可以高效非融合分离表达重组IFN-γ和重组CD,表达量分别古菌体总蛋白的33%和35%以上。这一体系的建立为研究IFN-γ和CD联合治疗肿瘤提供了基础。

论文目录

• 引言
• 第一章 人IFN-γ cDNA在大肠杆菌中的表达
• 1、材料和方法
• 1.1、材料
• 1.2、方法
• 2、结果
• 2.1、重组质粒pGIFN的构建
• 2.2、pGIFN在大肠杆菌中的诱导表达
• 3、讨论
• 第二章 大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶基因的克隆与表达
• 1、材料和方法
• 1.1、材料
• 1.2、方法
• 2、结果
• 2.1、大肠杆菌HB101基因组DNA的提取
• 2.2、CD的PCR扩增
• 2.3、扩增产物的克隆及pMD-CD载体的检测
• 2.4、表达载体pGCD的构建
• 2.5、CD在大肠杆菌中的诱导表达
• 3、讨论
• 第三章 IFN-γ、CD双顺反子表达载体的构建及表达
• 1、材料和方法
• 1.1、材料
• 1.2、方法
• 2、结果
• 2.1、pEGFP-IFN酶切检测
• 2.2、pGIFN-CD双顺反子表达载体的构建
• 2.3、pGIFN-CD的诱导表达
• 3、讨论
• 参考文献
• 文献综述：肿瘤的胞嘧啶脱氨酶治疗研究进展
• 致谢
• 硕士期间发表论文