蓖麻变应原降解菌的选育及降解条件的优化

论文摘要

目前,很多国家都把开发油料饼粕作为解决饲料蛋白质的主要来源之一,探讨新的蛋白质资源的开发技术已成为动物营养研究中的一个热点。本文从提高农副产品附加值,扩大动物饲料蛋白来源出发,力求探讨一种操作简便、经济、安全有效的蓖麻饼粕脱毒方法。主要研究了蓖麻饼粕中蓖麻变应原的提取分离和纯度检测,降解菌的分离、初步鉴定,对变应原降解条件的优化和脱毒效果。采用单因素实验和正交设计实验,对从蓖麻饼粕中提取变应原条件进行优化。结果表明,以水为溶剂提取2次,最佳工艺条件为:提取料液比为1:11,提取时间为9h,提取温度为82℃。提取的变应原经过SDS-PAGE电泳检测,变应原提取物只出现一条区带,表明所提取的变应原为纯品,其位置略低于标准蛋白中鸡蛋清溶菌酶（分子量为14400道尔顿）的区带。以蓖麻变应原为唯一碳源,从饲喂蓖麻饼粕的牛胃液、种植蓖麻的土壤和敞开发酵的蓖麻饼粕中,通过富集、初筛、复筛等步骤,筛选出N313、B202、B305菌株,分别对其进行了形态观察、生理生化实验、环境因素对菌株的影响、生长曲线测定及脱毒实验。结果表明,能够利用变应原为碳源的菌株N313、B202、B305为假单胞菌属（pseudomonas）。这三株菌均为好氧菌,生长温度范围为20～40℃;B202、B305菌生长pH范围为5～10,N313菌生长pH范围为5～7。N313、B305菌的对数生长期为5～16h,B202菌的对数生长期为3～14h。确定了N313、B202、B305菌对蓖麻饼粕脱毒的优化条件。三株菌的脱毒效果都能达到90%左右。对B202和对蓖麻碱降解率高的菌株B31进行复配发酵,两株菌生长情况良好,对变应原和蓖麻碱的降解率分别为74%和76%左右。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1 前言
• 1.1 蓖麻饼粕的研究概况
• 1.1.1 蓖麻饼粕的成分
• 1.1.2 蓖麻籽及榨油后饼粕的营养价值
• 1.1.3 蓖麻饼粕中的有毒成分
• 1.2 植物类过敏性蛋白（变应原）的研究进展
• 1.2.1 植物类变应原的种类
• 1.2.2 植物类变应原分子的功能研究
• 1.2.3 植物变应原基因的克隆和体外重组
• 1.3 蓖麻饼粕脱毒的研究进展
• 1.3.1 蓖麻饼粕脱毒的意义
• 1.3.2 蓖麻饼粕脱毒的方法
• 1.3.3 脱毒蓖麻饼粕在实际生产中的应用
• 1.4 本课题研究的目的、意义和内容
• 1.4.1 研究目的
• 1.4.2 研究意义
• 1.4.3 研究内容
• 2 材料与方法
• 2.1 材料与仪器设备
• 2.1.1 供试材料
• 2.1.2 实验药品
• 2.1.3 主要仪器设备
• 2.1.4 主要培养基
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 蓖麻变应原提取工艺的优化
• 2.2.2 蓖麻变应原脱毒菌株选育的研究
• 2.2.3 蓖麻变应原脱毒菌株降解条件的研究
• 2.2.4 蓖麻变应原和蓖麻碱降解菌复配发酵的综合评价
• 3 结果与讨论
• 3.1 蓖麻变应原提取工艺的优化
• 3.1.1 蓖麻饼粕中变应原含量测定的方法学研究
• 3.1.2 单因子实验的考察
• 3.1.3 正交实验优选蓖麻变应原提取工艺条件
• 3.1.4 变应原的电泳检测
• 3.2 蓖麻变应原脱毒菌株选育的研究
• 3.2.1 脱毒菌株的筛选
• 3.2.2 脱毒菌株的形态观察
• 3.2.3 脱毒菌株的生理生化特性
• 3.2.4 环境因素对脱毒菌株的影响
• 3.3 蓖麻变应原脱毒菌株降解条件的研究
• 3.3.1 种子培养条件的确定
• 3.3.2 脱毒条件的优化
• 3.3.3 优化条件下菌种的脱毒效果
• 3.4 蓖麻变应原和蓖麻碱降解菌复配发酵的综合评价
• 3.4.1 蓖麻饼粕发酵脱毒蓖麻碱含量测定的方法学研究
• 3.4.2 B31、B202复合后对蓖麻饼粕中毒素的降解
• 4 结论
• 4.1 蓖麻变应原提取工艺条件的优化
• 4.2 脱毒菌株的筛选及鉴定
• 4.3 脱毒菌株培养条件的确定及降解条件的优化
• 4.4 复配发酵的综合评价
• 5 展望
• 6 参考文献
• 7 攻读硕士研究生学位期间发表论文情况
• 8 致谢