论文摘要
UVB是波长在280-320nm的中波紫外线。随着臭氧层的日益破坏,到达地面的紫外线越来越多,UVB对人体造成的伤害也越来越大。UVB辐射可诱导机体产生活性氧自由基,从而引起细胞生物学改变,导致基因突变、致癌和细胞死亡。苹果是我国重要的食用水果之一,它含有大量的活性成分—苹果多酚(Apple polyphenols)。由于苹果具有抗氧化、清除自由基的功能所以备受学术界重视,本文在前人工作的基础上开展了对苹果多酚的提取、分离纯化、细胞损伤的防护与修复试验等方面的研究,以期对苹果多酚抗辐射特性进行全面的了解,为其开发利用提供理论依据。本试验以国光苹果为实验原料,应用响应面法对苹果多酚组合溶剂提取条件进行优化,确定出最佳的提取工艺参数。得到苹果多酚最佳提取条件为:提取时间60.04min、提取温度40.03℃、料液比为1:6.02 (mL/g)、70%乙醇与丙酮体积比为1:1.18。苹果经组合溶剂提取、静止沉淀得到苹果多酚粗品后,再经硅胶梯度洗脱分离纯化得到苹果多酚纯品,计算出苹果多酚得率为45.42%,纯度为62.5%。体外抗UVB细胞试验中,以HepG2细胞为靶细胞,选用MTT比色为检测指标,得到苹果多酚对HepG2细胞的半数抑制剂量IC50值为286.54μg/ml,进而研究了UVB照射剂量与细胞增殖的关系,发现低剂量UVB促进细胞增殖,高剂量UVB导致细胞死亡,并找到了UVB对细胞损伤的半致死剂量为111s。通过防护与修复试验研究发现,浓度为100μg/ml的苹果多酚对UVB辐射损伤有较强的防护作用,同时,浓度为150μg/ml的苹果多酚对UVB辐射损伤的修复能力最强。再应用DNA-Ladder法检测苹果多酚对细胞DNA损伤的防护与修复情况,琼脂糖凝胶电泳显示出典型的DNA梯状条带。
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