猪圆环病毒2型Cap蛋白单克隆抗体的研制

论文摘要

猪圆环病毒2型（Porcine Circuvirus 2）是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征（Postweaning multisystemic wasting syndrome, PMWS）的主要病原。PCV2包含两个开放式阅读框ORF1和ORF2,其分别编码病毒复制酶相关蛋白（Rep）和病毒衣壳蛋白（Cap）,其中Cap蛋白含有病毒主要抗原表位,可诱导猪体产生免疫保护作用。本研究利用GST Trap亲合层析柱将纯化的Cap蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术获得了一株单克隆抗体,主要内容包括：1本研究利用GST Trap亲合层析柱纯化的猪圆环病毒2型Cap蛋白免疫BALB／c小鼠,取脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞进行融合,用间接ELISA方法筛选,获得1株能稳定分泌抗Cap蛋白抗体的杂交瘤细胞株,命名为5H7。亚型鉴定结果为IgGl型,轻链为K链。间接免疫荧光试验与Western-blotting分析结果表明,该株单克隆抗体可与PCV2毒株感染细胞产生特异性反应,而不能与PCV1毒株反应。体外培养连续传代至第20代,仍能稳定分泌抗PCV2抗体,ELISA抗体效价达1：5000以上,,腹水ELISA抗体效价1：409600。2本研究用PCV2 Cap蛋白单克隆抗体5H7与这3株不同PCV2分离株进行间接免疫荧光试验,结果表明该株单抗可与PCV2不同分离毒株感染细胞产生特异性反应,而不能与PCV1毒株反应。从而为PCV2分离株的鉴定及Cap功能研究奠定了一定的基础。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 猪圆环病毒2型主要蛋白功能与抗原表位研究进展
• 1 猪圆环病毒主要蛋白功能研究
• 1.1 Rep蛋白功能
• 1.2 Cap蛋白功能
• 1.3 ORF3编码蛋白功能
• 1.4 ORF4编码蛋白功能
• 2 CAP蛋白抗原表位研究
• 参考文献
• 第二章 猪圆环病毒2型CAP蛋白单克隆抗体的研制
• 1 主要材料与试剂
• 2 方法
• 2.1 重组Cap蛋白的表达与纯化
• 2.2 动物免疫
• 2.3 间接ELISA检测PCV2抗体
• 2.4 SP2/0骨髓瘤细胞的准备
• 2.5 饲养细胞的制备
• 2.6 免疫脾细胞的制备
• 2.7 细胞融合
• 2.8 杂交瘤细胞株的建立
• 2.9 单抗的鉴定
• 3 结果
• 3.1 间接ELISA法检测PCV2抗体效价
• 3.2 杂交瘤细胞株的建立
• 3.3 单克隆抗体的鉴定
• 4 讨论
• 参考文献
• 全文总结
• 致谢
• 攻读学位期间发表的论文
• 附录