导读:本文包含了猪冠状动脉平滑肌细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:冠状动脉血管痉挛,同型半胱氨酸,血管平滑肌,YAP通路
猪冠状动脉平滑肌细胞论文文献综述
陈玉龙,万招飞,刘小军,范佳丽,薛嘉虹[1]（2019）在《同型半胱氨酸通过YAP通路调控大鼠冠状动脉血管平滑肌细胞高反应性的作用机制研究》一文中研究指出背景冠状动脉血管平滑肌细胞(VSMC)高反应性是导致冠状动脉痉挛的关键,而高同型半胱氨酸(Hcy)能诱导冠状动脉痉挛,但其具体作用机制尚不完全清楚。目的探讨Hcy通过YAP通路调控冠状动脉VSMC高反应性的作用机制。方法 2018年1—10月,将SD大鼠实施安乐死后在无菌环境中迅速去除心脏并制成长1.0～1.5 mm血管环。将新鲜的冠状动脉血管环作为A组;在37℃、5%CO2条件下,将在DMEM低糖培养基中培养的冠状动脉血管环作为B组,将在Hcy+DMEM低糖培养基中培养的冠状动脉血管环作为C组,将在维替泊芬(VP)+DMEM低糖培养基中培养的冠状动脉血管环作为D组,将在Hcy+VP+DMEM低糖培养基中培养的冠状动脉血管环作为E组;除A组外冠状动脉血管环均培养24 h。采用微血管张力检测仪检测内皮素B型受体激动剂蛇毒类似物(S6c)和内皮素1(ET-1)诱导的冠状动脉血管张力,采用Western blot法检测内皮素A型(ETA)受体、内皮素B型(ETB)受体、YAP、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)、ERK1/2、磷酸化mTOR(p-mTOR)、mTOR、磷酸化AMPK(p-AMPK)、AMPK及Sirt1的表达水平。结果 (1)Hcy可增强S6c和ET-1呈浓度依赖方式介导的冠状动脉血管收缩。C组冠状动脉血管环的ETA受体/β-actin、ETB受体/β-actin及YAP/β-actin高于A组和B组,B组冠状动脉血管环的ETB受体/β-actin及YAP/β-actin高于A组(P<0.05)。(2)VP能有效抑制由Hcy上调的S6c和ET-1呈浓度依赖方式介导的冠状动脉血管收缩。C组大鼠冠状动脉血管环ETA受体/β-actin、ETB受体/β-actin及YAP/β-actin高于B、D、E组(P<0.05)。(3)C组冠状动脉血管环p-ERK1/2/ERK1/2、p-mTOR/mTOR高于B、D、E组(P<0.05);B组冠状动脉血管环p-ERK1/2/ERK1/2高于D组,p-AMPK/AMPK及Shirt1/β-actin高于C、D、E组(P<0.05)。结论 Hcy可能通过YAP通路激活ERK1/2和mTOR信号通路,上调VSMC内皮素受体,进而增强冠状动脉VSMC高反应性,这将为高Hcy致冠状动脉痉挛的具体作用机制研究提供新的理论依据。(本文来源于《实用心脑肺血管病杂志》期刊2019年09期）
杨晓伟,张拓伟,闫泱锦[2]（2019）在《MicroRNA-574-5p对冠状动脉平滑肌细胞生长的影响及其调控机制》一文中研究指出目的:研究miRNA-574-5p对冠状动脉平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖的影响及其调控的分子机制。方法:实时定量PCR检测冠心病(coronary artery heart disease,CAD)患者及健康体检者外周血中miRNA-574-5p的表达及正常人VSMCs细胞中miRNA-574-5p及ZDHHC14的表达。MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡。双荧光素酶报告分析检测miRNA-574-5p与靶基因的结合。结果:与正常体检者对比,CAD患者血清中miRNA-574-5p的表达显着增加(P<0.05)。与阴性对照组相比,miRNA-574-5p类似物显着提高VSMCs的增殖(P<0.01),降低VSMCs的凋亡(P<0.01)。经在线miRNA靶基因预测软件分析,miRNA-574-5p的一个靶基因为ZDHHC14。miRNA-574-5p降低ZDHHC14 3'UTR端的荧光素酶活性(P<0.01),且抑制其表达(P<0.01)。ZDHHC14过表达降低miRNA-574-5p诱导的VSMCs的增殖(P<0.05),提高miRNA-574-5p诱导的VSMCs的凋亡(P<0.05)。结论:miR-574-5p通过抑制ZDHHC14表达促进VSMCs增殖,并抑制其凋亡。miR-574-5p可能为CAD相关因子,并可能成为CAD治疗的潜在分子靶点。(本文来源于《川北医学院学报》期刊2019年02期）
陈俭,李传荣,王瑞敏,毛幼林,黄琼[3]（2019）在《B族Ⅰ型清道夫受体过表达对血小板源性生长因子诱导的冠状动脉平滑肌细胞增殖和迁移的影响》一文中研究指出目的探讨B族Ⅰ型清道夫受体(SR-BⅠ)在人冠状动脉平滑肌细胞(hCASMC)增殖和迁移过程中的作用及机制。方法常规培养hCASMC,根据处理方法将细胞分为空白对照组、5μg·L~(-1)血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)组、10μg·L~(-1)PDGF-BB组、20μg·L~(-1)PDGF-BB组、20μg·L~(-1)PDGF-BB+腺病毒绿色荧光蛋白(AdGFP)组(PDGF-BB+Ad-GFP组)、20μg·L~(-1)PDGF-BB+Ad-GFP-SR-BⅠ组(PDGF-BB+Ad-GFP-SR-BⅠ组)。采用噻唑兰法检测各组细胞增殖情况,Western blot法检测各组细胞中SR-BⅠ表达,Transwell法检测各组细胞迁移情况。结果空白对照组及5、10、20μg·L~(-1)PDGF-BB组细胞中SR-BⅠ相对表达量分别为1.00±0.05、0.76±0.08、0.52±0.06、0.30±0.05,5、10、20μg·L~(-1)PDGF-BB组细胞SR-BⅠ相对表达量均显着低于空白对照组(P<0.05),10、20μg·L~(-1)PDGF-BB组细胞SR-BⅠ相对表达量均显着低于5μg·L~(-1)PDGF-BB组(P<0.05),20μg·L~(-1)PDGF-BB组细胞SR-BⅠ相对表达量显着低于10μg·L~(-1)PDGF-BB组(P<0.05)。培养24、48、72 h时,5、10、20μg·L~(-1)PDGF-BB组及PDGF-BB+Ad-GFP组、PDGF-BB+Ad-GFP-SR-BⅠ组细胞增殖能力均显着高于空白对照组(P<0.05),10、20μg·L~(-1)PDGF-BB组及PDGF-BB+Ad-GFP组、PDGF-BB+Ad-GFP-SR-BⅠ组细胞增殖能力显着高于5μg·L~(-1)PDGF-BB组(P<0.05),20μg·L~(-1)PDGF-BB组、PDGF-BB+Ad-GFP组、PDGF-BB+Ad-GFP-SR-BⅠ组细胞增殖能力显着高于10μg·L~(-1)PDGF-BB组(P<0.05); PDGF-BB+Ad-GFP-SR-BⅠ组细胞增殖能力低于20μg·L~(-1)PDGF-BB组和PDGF-BB+Ad-GFP组(P<0.05); 20μg·L~(-1)PDGF-BB组与PDGF-BB+Ad-GFP组细胞增殖能力比较差异无统计学意义(P>0.05)。空白对照组、20μg·L~(-1)PDGF-BB组、PDGF-BB+Ad-GFP组及PDGFBB+Ad-GFP-SR-BⅠ组细胞迁移数分别为24.2±3.6、76.6±4.2、75.2±4.8和60.6±3.6,各组细胞迁移数比较差异有统计学意义(F=40.695,P<0.01); 20μg·L~(-1)PDGF-BB组、PDGF-BB+Ad-GFP组及PDGF-BB+Ad-GFP-SR-BⅠ组细胞迁移数显着高于空白对照组,PDGF-BB+Ad-GFP-SR-BⅠ组细胞迁移数显着低于20μg·L~(-1)PDGF-BB组、PDGF-BB+Ad-GFP组(P<0.05); 20μg·L~(-1)PDGF-BB组与PDGF-BB+Ad-GFP组细胞迁移数比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PDGF-BB能够促进h CASMC增殖和迁移,并减少SR-BⅠ表达,过表达SR-BⅠ能够抑制PDGFBB的作用,抑制h CASMC增殖和迁移。(本文来源于《新乡医学院学报》期刊2019年05期）
刘亚杰[4]（2019）在《自噬参与心外膜祖细胞向冠状动脉平滑肌细胞分化的实验研究》一文中研究指出研究冠脉血管的发育,明确冠脉血管平滑肌细胞(coronary smooth muscle cells,CoSMCs)的起源及分化机制,将为先天性心脏病的防治及心肌梗死后冠脉侧枝循环血管的形成等研究领域提供重要信息。目前研究提示,心外膜祖细胞(Epicardial progenitor cells,EPCs)是CoSMCs的主要起源,但EPCs向CoSMCs分化的具体机制尚不完全明确。自噬(autophagy)是由溶酶体介导的蛋白质及其他细胞器的分解过程,与衰老的细胞器及破坏的蛋白质的清除和维持细胞内环境稳定有密切关系。既往研究证实自噬在哺乳动物的心脏发育与重塑组织和细胞分化过程起着重要作用,但尚无证据表明自噬是否能够参与调控EPCs向CoSMCs分化。在本研究中,我们成功体外培育了小鼠原代EPCs,并通过自噬的诱导和抑制实验观察自噬对EPCs向平滑肌细胞分化的影响,同时进一步在体观察自噬对小鼠冠脉平滑肌发育的影响,以期证实自噬参与调控心外膜祖细胞向冠状动脉平滑肌细胞分化。第一部分:原代EPCs的培养与鉴定目的:探讨构建高纯度心外膜祖细胞的方法,为体外培养并揭示心外膜祖细胞的分化机制奠定基础。方法:首先分离E11.5小鼠胚胎心脏,利用组织贴壁法建立心外膜祖细胞体外培养模型。镜下观察培养细胞的自身特性,进一步通过qRT-PCR技术及免疫荧光技术检测心外膜祖细胞标志基因Tbx18及WT1基因的表达,借此来检测培养的细胞纯度。结果:成功培养出原代心外膜祖细胞群。并首先以形态学观察证实该原代细胞群具有典型上皮形态,并连续观察72小时证实该细胞群分化的形态学变化。进一步以心肌细胞为对照组,通过qPCR及免疫荧光证实该细胞能同时表达心外膜祖细胞标志性基因Tbx18及WT1。结论:通过组织贴壁法进行原代培养所得心外膜祖细胞方法相对简单且同时表达多个心外膜上皮标志基因,细胞纯度高。体外培养的原代心外膜祖细胞爬出后形成的细胞群形态和排列均呈典型上皮形态,且在形态学上观察到能够进一步分化,为后续心外膜祖细胞的分化研究打下基础。第二部分:体外实验揭示细胞自噬对心外膜祖细胞向平滑肌细胞分化的影响目的:探讨细胞自噬对心外膜心外膜祖细胞向平滑肌细胞分化的影响,及对EPCs分化而来的SMCs功能的影响。方法:在原代心外膜祖细胞模型店基础上,用自噬诱导剂RAPA及抑制剂3-MA分别建立了自噬诱导和抑制模型。观察自噬诱导/抑制对心外膜祖细胞分化的形态学影响,并通过qPCR测定自噬相关Akt及mTOR的mRNA水平变化。进一步通过MDC染色及LC3B蛋白荧光染色及Westernblot实验揭示心外膜祖细胞分化过程是否细胞自噬。后以qPCR及免疫荧光检测培养72h后细胞平滑肌标志蛋白a-SMA及MYH11水平,MTT实验检测各组细胞增殖能力。再收集培养96h细胞,以胶原凝胶收缩实验评价其收缩功能,划痕实验评价细胞迁移能力。结果:我们的实验观察到,RAPA在72h内显着诱导心外膜祖细胞自噬水平上调,进而导致心外膜祖细胞增殖明显减慢,但长梭形大体积异形细胞增多。免疫荧光染色见RAPA组a-SMA及MYH11峰值提前,提示自噬可能诱导心外膜祖细胞提前分化,在细胞培养48h即出现大量梭形,异形的分化细胞,结合免疫染色结果可见RAPA诱导的自噬使平滑肌细胞的分化提前,但增殖较NORMAL组及3-MA组明显减弱。而在3-MA组其自噬水平明显下调后,出现细胞增殖及迁移上调,而分化延迟的表现。提示抑制自噬可能抑制心外膜祖细胞向平滑肌细胞分化,而促进其增殖及迁移。结论:细胞自噬参与调控心外膜祖细胞向平滑肌细胞分化,自噬上调可能诱导心外膜祖细胞提前分化,而使平滑肌细胞收缩能力增强,增殖迁移能力下降,而抑制则可能抑制心外膜祖细胞向平滑肌细胞分化,而促进其增殖及迁移。第叁部分:体内实验揭示自噬对小鼠冠状动脉发育的影响目的:在组织水平明确心外膜祖细胞对冠脉血管平滑肌发育的影响及自噬标识信号分子与平滑肌标志基因的空间定位关系,从而在体探讨自噬对心外膜祖细胞对冠状动脉发育的影响。方法:应用羊膜腔注射给药的方式建立小鼠自噬诱导/抑制模型,通过HE染色观察自噬诱导/抑制对小鼠E12.5-E14.5冠脉发育的结构影响,通过qPCR及免疫荧光观察自噬对小鼠冠状动脉平滑肌分化过程中a-SMA的RNA及蛋白表达的影响,进而将自噬标志蛋白LC3B与平滑肌细胞标志蛋白MYH11共染,观察两者的空间定位关系。结果:自噬诱导后,心脏几乎未能形成管腔发育成熟的冠状动脉血管,但可见心内膜下逐渐出现的血窦样变化,提示小鼠心脏发育未能发育出成熟冠脉及建立有效的冠脉循环。同时亦观察到自噬诱导后出现的心室流出道发育障碍,心脏循环缺陷及心室壁变薄。qPCR及组织免疫荧光结果提示,小鼠E12.5-14.5的自噬现象可同时出现在心外膜及心肌组织中。而自噬诱导组我们可见在E12.5天时,心外膜内的心肌组织中a-SMA的表达量略高于NORMAL组,但在E14.5天时,RAPA组a-SMA表达量明显低于NORMAL组,并且未能发育为成熟冠状动脉管腔。而在E12.5-14.5天,自噬抑制组a-SMA表达量各时间段均低于NORMAL组,最终冠状动脉周围a-SMA表达量也比NORMAL组更低。荧光共染实验证实,多处心外膜及心外膜下MYH11阳性细胞能够与LC3B蛋白共表达。结论:自噬在冠脉发育中需要适宜的强度。过度激活自噬可能导致导平滑肌细胞的提前分化和迁移能力增强,有可能使内皮细胞周围平滑肌细胞的募集失调,不能形成有效的冠脉管腔。总体来说,冠状动脉发育受到抑制。而自噬抑制可能使心外膜祖细胞分化延迟,从而使冠脉形成的数量减少。心外膜祖细胞向冠脉平滑肌分化的过程需要适宜的自噬强度。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2019-05-01）
张华巍[5]（2018）在《血流剪切力调控内皮细胞外泌体分泌进而调控冠状动脉平滑肌细胞增殖和迁移》一文中研究指出研究背景:大部分粥样斑块好发的位置在血管分叉、弯曲以及狭窄等血流稍慢的地方。研究表明,由于剪切力高低的不同,造成的结果也不一样,大部分平直的血管,受到的是高剪切力刺激,也就是我们俗称的高剪切力,近期研究结论认为高剪切力具有抗动脉粥样硬化形成的作用。而在血管分叉,弯曲等位置,容易产生涡流,以致血流方向不均一,速度受到影响,与之前位置相比明显降低的剪切力(剪切力0± 4 dyne/cm2),这一剪切力与之前数据相比,也称之为低剪切力,一定程度上促进了动脉粥样硬化斑块的形成与发展。外泌体,主要是由细胞内部囊泡运输体组成。它的形成主要通过细胞外泌囊泡,囊泡直径一般在30-l00nm之间,外泌体最重要的功能是可以装载细胞的各种成分,同时可以选择性地传递至靶细胞,继而引起靶细胞的改变。其中,Exosomes区别于其他信号通路的最大特点能在细胞间直接摄取,并能有效的转运包括miRNA在内的核酸序列。目的:为了初步探索Exosomes是否参与致A S的机制中,并探讨血流剪切力对于外泌体分泌是否有影响。方法通过新生儿脐带提取HUVECs并培养,对于培养的上述细胞给予不同时间剪切力的干预并通过超速离心法分离外泌体。采用BCA法测量总的蛋白含量以及外泌体蛋白含量,同时通过免疫印迹法测量获得的外泌体的表型蛋白。实验结果1.外泌体表型蛋白western blot鉴定本实验对离心所得exosomes进行western blot方法检测TSG101,CD63表达情况,以细胞蛋白作为阳性对照,测量外泌体表型蛋白。2.低剪切力对HUVECs外泌体蛋白浓度的影响低剪切力刺激后外泌体数量随着时间的延长有着明显的改变,在24小时蛋白浓度达到了高峰,与对照组相比有着明显的差异。3.低剪切力对HUVECs外泌体蛋白/细胞蛋白浓度的影响给予不同时间的剪切力刺激后,刺激时间越长,外泌体分泌的数量越多,也证实了低剪切力下,外泌体的分泌与刺激时间成正相关。结论1.通过原始HUVECs细胞可以培养外泌体,同时应用超速离心法能有效的分离HUVECs 颗粒,提取 exosomes。2.内皮细胞中外泌体表达受剪切力调控:低剪切力刺激时间越长,外泌体分泌的数量越多。研究背景近年来随着对其研究的深入,外泌体这一特定基因携带体逐渐被人们认识。外泌体(Exosomes)是如何起作用的,它主要通过细胞外泌囊泡形成,囊泡直径一般在30-1OOnm之间,外泌体最重要的功能是可以装载细胞的各种成分,同时可以选择性地传递至靶细胞,继而引起靶细胞出现改变。目的外泌体主要起一个传递信号的作用,具体的影响作用还要靠其中携带的不同的miRNA的作用。而血流剪切力能否增强携带miRNA的作用。同时通过低剪切力的刺激使哪种miRNA引起改变呢。本研究通过培养的内皮细胞给予低剪切力刺激,通过免疫荧光法观察能否引起外泌体内所含基因的改变。实验方法通过新生儿脐带提取HUVECs并培养,对于培养的上述细胞给予不同时间剪切力的干预并通过超速离心法分离外泌体。对于不同组的外泌体细胞提取总的RNA,目的是通过荧光定量方式显示miRNA表达是否存在不同。结果与静止对照组相比,低剪切力刺激组明显上调miRNA-145,miRNA-143等基因的表达,而其它相关基因与静止组相比上调变化不大,(P<0.05)。结论1.外泌体主要是通过其携带的微小基因来进行信号传导,进而在细胞层面调控细胞的迁移与增殖。2.受剪切力的影响,在剪切力刺激后外泌体中携带的miRNAs表达差异相差较大。研究背景动物实验的冠脉血管内超声研究表明,大部分易损斑块容易发生的位置在哪,一般来说发生在低ESS的血管段。并且,基线上低ESS的程度严重影响了斑块进展。之前的研究中观察了体外作用下低剪切力引起内皮细胞外泌体分泌增加,同时改变了外泌体中所含的信号转导机制。目的本部分研究通过体外研究方式将提取的低剪切力刺激后的外泌体与静止状态下的外泌体分别转染冠状动脉平滑肌细胞,观察其对冠状动脉平滑肌细胞的作用,通过免疫荧光法及蛋白印迹法证实能否引起冠状动脉平滑肌细胞的增值与迁移。实验方法在外泌体与动脉平滑肌内皮细胞一起孵育后,为观察能否有效,通过荧光共聚焦显微镜观察hCASMCs摄取外泌体的效果,并通过MTT方法检测hCASMCs增值水平,Transwell实验检测hCASMCs迁移水平以及western blot检测hCASMCs相关表型蛋白实验结果1荧光共聚焦显微镜观察hCASMCs摄取外泌体荧光共聚焦显微镜可以观察到动脉平滑肌细胞能有效摄取外泌体。2 Transwell实验检测hCASMCs迁移水平与空白对照组相比,经过摄取低剪切力处理组的外泌体后,冠状动脉平滑肌细胞的迁移能力明显增加,与静止组摄取的外泌体相比,迁移能力得到明显提升,两组之间存在统计学差异,同样,酶标仪检测迁移细胞吸光度值也反映同样的结果(P<0.05)。3.低剪切力处理后HUVECs分泌的外泌体对hCASMCs增殖能力的影响与空白对照组相比,通过酶标仪检测迁移细胞吸光度值,经过摄取低剪切力处理组的外泌体后,冠状动脉平滑肌细胞的增值能力明显增加,与静止组摄取的外泌体相比,增值能力得到明显提升,两组之间存在统计学差异。(P<0.05)。4低剪切力处理后HUVECs分泌的外泌体对hCASMCs表型转换的影响叁组之间通过蛋白印迹法测量处理后的冠状动脉平滑肌细胞的表型蛋白,可见通过低剪切力处理的外泌体被摄取后,冠状动脉平滑肌内皮细胞对于Osteopontin,Epiregulin,Elasti几类蛋白与对照组和空白组相比有差异,a-SMA,Caldesmon,Calponin差异不大。结论1.将低剪切力处理组和对照组外泌体使用PKH67标记,与hCASMCs共孵育24小时。荧光共聚焦显微镜证实hCASMCs确实能够摄取外泌体。2.对比空白对照组(不加外泌体)、对照处理HUVECs分泌的外泌体刺激以及低剪切力处理HUVECs分泌的外泌体刺激,低剪切力处理的外泌体对于hCASMCs迁移能力较其他两组有了明显提高。3.低剪切力处理后HUVECs分泌的外泌体对hCASMCs增殖能力,对比空白对照组(不加外泌体)、对照处理HUVECs分泌的外泌体刺激,增殖能力有了明显提高。4.低剪切力处理的外泌体对于hCASMCs增生以及蛋白表型的变化较其他两组没有显着差异。研究背景通过前面的研究我们发现低剪切力可以刺激原始内皮细胞产生较多的外泌体。通过分泌的外泌体与平滑肌细胞的孵育培养,观察到平滑肌细胞可以充分的摄取外泌体,继而引起下一步的信号转导。而外泌体仅仅是作为一种直接转运RNA的载体,其可以转运多种小分子RNA,从而引起不同细胞之间的不同作用。不同的RNA在信号转导过程中起的作用是不一样的,到底是哪个基因在信号转导中起了主要作用,必须将其单独给予增强来证实这一点。目的单独将miRNA-145作为单独研究对象,并通过与其抑制剂及阴性对照组进行比较,观察该基因是否能增强细胞的增值与迁移,继而可以明确是否通过该基因的调控来促进平滑肌细胞的迁移与增殖。从而最终获取低剪切力是通过调节何种基因来改变平滑肌细胞的性能的。实验方法通过购买的合成的miR-145的mimic,inhibitor,和negative。对外泌体细胞进行转染,根据酶标仪测量转染的效率,同时通过转染的外泌体被内皮细胞摄取后,测量hCASMCs迁移能力,增殖水平以及外泌体对hCASMCs表型转换的影响。实验结果1转染效率的验证含miRNA-145,miRNA-145抑制剂以及阴性对照剂的不同组经过多代细胞培养后。含miRNA-145转染效果明显高于另外2组,与另外两组相比之间存在统计学差异。(P<0.05)。2 MTT法检测外泌体对hCASMCs增殖水平的影响采用MTT方法检测通过冠状动脉平滑肌细胞摄取含有不同miRNA的外泌体后,细胞增值能力的改变,通过酶标仪检测迁移细胞吸光度值,含miRNA-145外泌体的被内皮细胞摄取后,冠状动脉平滑肌细胞的增殖能力明显增加,与另外两组相比之间存在统计学差异。(P<0.05)。3.各组外泌体对hCASMCs迁移能力的影响与加入抑制剂的对照组及阴性试剂的对照组相比,经过摄取含miRNA-145组的外泌体后,冠状动脉平滑肌细胞的迁移能力得到明显提升,叁组之间存在统计学差异,(P<0.05)。4 Western blot检测外泌体对hCASMCs表型转换的影响叁组之间通过蛋白印迹法测量处理后的冠状动脉平滑肌细胞的表型蛋白,可见含有miRNA-145的外泌体被摄取后,冠状动脉平滑肌内皮细胞对于a-SMA,Caldesmon,Calponin,Osteopontin,Epiregulin,Elasti 几类表型蛋白与对照组和空白组相比有明显差异。结论1.在外泌体含有的基因中,miRNA-145对细胞增殖作用以及迁移能力是明显提高的。2.抑制了 miRNA-145后,其他基因对于平滑肌内皮细胞的增殖作用以及迁移能力没有太大影响。3.低剪切力是通过调节HUVECs分泌的外泌体中特定miRNA对冠状动脉平滑肌细胞增殖、迁移和表型转换产生作用。(本文来源于《中国人民解放军医学院》期刊2018-05-23）
卢平[6]（2018）在《尿毒症大鼠冠状动脉平滑肌细胞内钙离子浓度的变化及其机制探讨》一文中研究指出背景:尿毒症是慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)终末期共有的临床综合征,目前已成为严重危害人类健康的主要慢性疾病之一。同时,尿毒症患者心血管疾病(cardiovascular disease,CVD)发病率较其他人群为高,其中又以冠状动脉病变为甚。冠状动脉病变已成为尿毒症患者致死的一个重要病因。但其机制目前尚不清楚,可能与离子通道结构与功能异常有关。本课题组前期实验研究表明:尿毒症大鼠冠状动脉病变与大电导钙激活钾通道(The large conductance Ca2+-activated K+(BK)channel,BK通道)表达下调及瞬时受体电位C通道1(classical transient receptor potential channel,TRPC1通道)表达上调有关。它们对维持血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)的膜电位以及血管收缩和舒张功能的调节具有重要作用。其中,TRPC1通道表达增加时,钙离子内流则会增加,引起血管收缩,导致高血压、动脉粥样硬化等。而抑制TRPC1通道表达或者用特异性通道阻滞剂可降低细胞内钙离子浓度,介导血管舒张。然而,关于尿毒症冠状动脉平滑肌细胞内钙离子浓度的变化及其机制的研究目前尚未见相关报道。目的:研究尿毒症对大鼠冠脉平滑肌细胞内钙离子浓度的影响,探讨尿毒症大鼠冠脉平滑肌细胞内钙离子浓度变化的可能分子机制。方法:(1)将各项检测基线值无明显差异的健康SD大鼠随机分为两组:尿毒症模型组:采用5/6肾大部分切除法造模;正常组:即假手术组,只分离肾被膜。两组大鼠均于手术前和手术后第2、6、10、14、18、22周于眼眶采静脉血检测血清尿素氮(BUN)、血清肌酐(Scr),以判断尿毒症大鼠模型是否成功建立,并同期测量鼠尾动脉收缩压(SBP)以观察正常组及模型组大鼠血压的动态改变。(2)采用急性酶消化法分离正常组及尿毒症模型组大鼠冠状动脉平滑肌细胞。(3)采用免疫荧光钙成像技术分别检测正常组和尿毒症模型组大鼠冠状动脉平滑肌细胞内的钙离子浓度。(4)采用免疫荧光钙成像技术分别检测正常组和尿毒症模型组大鼠冠状动脉平滑肌细胞内加入TRPC1通道阻滞剂SKF96365后两组大鼠冠状动脉平滑肌细胞内钙离子浓度的变化。结果:(1)尿毒症大鼠模型的鉴定:(1)肾功能的变化:与正常组相比,尿毒症模型组大鼠从术后第2周始出现血肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)的升高,在22周时血肌酐值高达(98.46±3.08)μmol/L,血尿素氮高达(44.78±0.21)mmol/L,而正常组血肌酐值为(24.28±1.22)μmol/L,血尿素氮为(7.23±0.31)mmol/L,符合造模要求。(2)SBP的变化:术前两组大鼠血压无显着差异,尿毒症模型组大鼠(n=20)SBP从术后第2周始升高,第2周时尿毒症模型组大鼠血压为(130.2±4.8)mmHg,而正常组大鼠(n=16)血压为(112.4±3.2)mm Hg,两组相比差异有统计学意义(P<0.05);并且随着术后时间的延长,模型组血压逐步上升,在术后第6、10、14、18、22周时模型组血压值分别为(138.4±4.2)mmHg、(150.6±6.6)mmHg、(161.4±6.2)mmHg、(167.2±6.4)mmHg、(179.4±7.3)mmHg,和正常组对比后差异有统计学意义(P<0.05)。(2)MetaFluor软件实时采集的图像显示:(1)正常组和尿毒症模型组冠状动脉平滑肌细胞内荧光信号强度比值R(代表细胞内相对钙离子浓度)分别为:0.4968±0.0212和0.6142±0.0208,两组间差异有统计学意义(P<0.05);(2)正常组冠状动脉平滑肌细胞用SKF96365预孵育前后细胞内荧光信号强度比值分别为:1.7426±0.021和0.7124±0.034,两组间差异有统计学意义(P<0.05);(3)尿毒症组冠状动脉平滑肌细胞用SKF96365预孵育前后细胞内荧光信号强度比值分别为:3.1068±0.0224和1.1246±0.0206,两组间差异有统计学意义(P<0.05);(4)尿毒症和正常组冠状动脉平滑肌细胞分别用SKF96365预孵育前后细胞内的荧光信号强度比值差分别为:1.3642±0.215和1.0302±0.027,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1.尿毒症时大鼠冠状动脉平滑肌细胞内钙离子浓度增高。2.尿毒症时大鼠冠脉平滑肌细胞内钙离子浓度增高可能与TRPC1通道表达上调有关。(本文来源于《南昌大学》期刊2018-05-01）
吴琪[7]（2018）在《STIM 1/Orai 1信号通路在高压负荷诱导冠状动脉血管平滑肌细胞异常增殖中的机制研究》一文中研究指出高血压是最常见的慢性疾病,它所引起的心、脑和肾等靶器官的损害,可增加冠心病、卒中等心脑血管疾病的发生率,给人类带来非常大的身心负担和经济负担。冠心病是高血压非常重要的靶器官损害之一。流行病学调查显示,我国冠心病患者中约60%合并高血压,而高血压病的人群患冠心病的概率比无高血压的人群高出4倍。冠心病的发生发展与高血压血管功能障碍密切相关,其相关分子机制的研究越来越受到人们的关注。目的:通过观察高压负荷对冠状动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转化和收缩相关蛋白表达的变化和增殖影响,探讨高血压导致冠心病的可能发病机制。方法:选取SPF级16-18周龄的雄性SHR和Wistar大鼠各10只。二氧化碳处死大鼠,快速取出心脏,通过体视显微镜分出左右冠状动脉,通过苏木精-伊红(HE)染色法观察高血压冠状动脉的结构改变,免疫组织化学法观察高血压冠状动脉Orai1的表达改变。再通过组织贴壁法培养SHR和Wistar大鼠冠状动脉VSMCs,部分用于Western blot检测两组大鼠冠状动脉的表型转化蛋白标志物:α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、平滑肌肌球蛋白重链(SM-MHC)、平滑肌22α(SM22α)、骨桥蛋白(OPN)以及通路相关蛋白:基质相互作用分子(STIM1)、Orai1、L-型钙通道(Cav1.2)、钙/钙调磷酸酶(Calcineurin)、活化T细胞核因子(NFAT)的蛋白表达水平。部分Wistar大鼠冠状动脉VSMCs给予不同高静水压处理24h,再通过Western blot检测其上述蛋白的表达水平。其余部分冠状动脉VSMCs用细胞计数(CCK-8)观察不同压力处理后,对细胞数量的影响,以及β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,β-gal)试剂盒染色观察两组大鼠冠状动脉VSMCs对细胞衰老的影响。结果:(1)HE染色发现Wistar组冠状动脉VSMCs排列整齐,中膜弹力纤维无增生,内膜均一,而SHR组冠状动脉中膜增厚,VSMCs排列紊乱,形态不规则,内皮细胞排列紊乱。(2)免疫组织化学法发现Orai1在高血压冠状动脉VSMCs的表达增多。(3)发现SHR冠状动脉VSMCs的收缩表型标志物SM-MHC以及相关蛋白Cav1.2、NFAT_2的表达明显下调,合成表型标志物OPN以及相关蛋白STIM1、Orai1、Calcineurin表达明显上调;(4)通过高静水压(分0mmHg组、120mmHg组、180mmHg组)处理冠状动脉VSMCs 24h后,120mmHg组和180mmHg组的SM-MHC、α-SMA、Cav1.2蛋白表达以及180mmHg组的NFAT_2蛋白表达较0mmHg组明显下调;120mmHg组和180mmHg组的OPN、Calcineurin蛋白表达以及180mmHg组STIM1、Orai1蛋白表达较0mmHg组明显上调;(5)SHR组冠状动脉VSMCs在24h、48h、72h的增殖能力均较同代数的Wistar组明显降低,而细胞衰老百分率却明显增多。(6)通过高静水压处理冠状动脉VSMCs 24h后,120mmHg组和180mmHg组在48h的增殖能力较0mmHg组明显降低;结论:高血压可能通过激活STIM1,使Orai1通道表达上调,激活calcineurin-NFAT信号途径,使冠状动脉VSMCs出现表型转化,导致冠脉功能改变,最终导致冠状动脉粥样硬化。(本文来源于《南昌大学》期刊2018-05-01）
吴转转[8]（2018）在《冠状动脉支架植入对血管平滑肌细胞力生长因子及超微结构影响的实验研究》一文中研究指出目的研究牵张力介导的力生长因子高表达对临床支架再狭窄的作用,并探讨其相关机制,为临床解决支架再狭窄提供理论依据。方法随机将雄性Beagle犬分成2组,每组7只:支架植入组及经皮球囊冠状动脉成形术组。在前降支近中段植入3.0*16mm支架后立刻对2组实验动物行冠状动脉造影,并对支架植入组动物冠脉内支架植入情况进行评估。1个月后对再狭窄的冠状动脉行病理切片染色检测冠状动脉内膜、血管平滑肌细胞增生、迁移、血栓形成及炎症细胞浸润情况;电镜观测支架植入后靶血管平滑肌细胞的超微结构,原位杂交技术评估靶血管的血管平滑肌细胞的力生长因子m RNA表达,Western blot检测靶血管的血管平滑肌细胞力生长因子蛋白表达水平,并于术前及术后1个月分别采集血清学标本用ELISA试剂盒检测血清力生长因子水平。采用SPSS 17.0统计学软件进行统计学分析,计量资料用均数±标准差表示,两组间比较行t检验。结果冠状动脉支架植入后立刻行冠脉造影,结果示2组实验动物在术后均未见血管狭窄,支架植入成功;支架植入后1个月冠状动脉病理学分析提示支架植入组可见内膜增厚、冠脉平滑肌细胞增殖、迁移、炎症细胞明显浸润及血栓形成,导致管腔狭窄,经皮球囊冠状动脉成形术组未见明显改变;电镜观察发现平滑肌细胞细胞器数量增多及体积增大,提示平滑肌细胞已从收缩型转变为合成型;原位杂交法及Western blot分析结果均提示支架植入1个月后靶血管的平滑肌细胞高表达力生长因子,且与经皮球囊冠状动脉成形术组相比,P<0.01,差异有统计学意义;而术前及术后2组力生长因子血清学水平则无明显差异。结论力生长因子是力敏感性的因子,支架扩张造成血管壁牵张力增加,促进炎症反应,诱导局部冠状动脉平滑肌细胞高表达力生长因子,引起冠脉血管平滑肌细胞增殖、迁移及表型改变,促进支架再狭窄的发生。因此,力生长因子作为一种修复因子,适当的抑制力生长因子可能会有效的降低支架再狭窄的出现。(本文来源于《锦州医科大学》期刊2018-03-01）
陈肖燕[9]（2017）在《毒胡萝卜素诱导冠状动脉血管平滑肌细胞内质网应激模型的建立》一文中研究指出目的：探讨Sprague-Dawley(SD)大鼠冠状动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)体外培养方法，并建立冠脉VSMCs内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)细胞模型。方法：在无菌条件下分离SD大鼠冠状动脉，剪碎组织，呈块状，贴壁培养。用光学显微镜观察细胞生长的基本形态变化及特征。用免疫荧光技术检测VSMCs分子标志α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin，α-SMA)和平滑肌肌球蛋白重链(smooth muscle myosin heavy chain,SM-MHC)。毒胡萝卜素(thapsigargin,TG)处理VSMCs 24小时后，采用蛋白质免疫印记法，检测ERS标志性分子免疫球蛋白结合蛋白(binding immunoglobulin protein,BiP)和C/EBP同源蛋白(C/EBP homologus ptotein,CHOP)蛋白表达水平。结果：细胞鉴定提示所获得的细胞为VSMCs，蛋白质免疫印记结果提示VSMCs内质网应激反应明显增强。结论：采用毒胡萝卜素可成功建立冠状VSMCs内质网应激细胞模型。(本文来源于《2017年第五次世界中西医结合大会论文摘要集（中册）》期刊2017-12-06）
李红梅,王显[10]（2016）在《基于脂多糖诱导人冠状动脉平滑肌细胞炎性活化的热毒生风型络风内动细胞模型构建》一文中研究指出目的:利用脂多糖(LPS)诱导体外培养的人冠状动脉平滑肌细胞(HCASMC)TLR4-My D88炎性反应通路活化,建立热毒生风型络风内动细胞模型,为络风内动研究平台的科学化寻求新突破。方法:体外原代培养HCASMC,MTT法检测不同浓度(0、0.01、0.1、0.5、1、5、10、100μg/m L)LPS对HCASMC活力的影响,筛选出HCASMC活力在98%以上的LPS无毒性浓度范围。ELISA法检测无毒性浓度范围内LPS作用不同时间(6、24、48h)对细胞上清IL-6、TNF-α和IL-1β释放水平的影响,筛选出小范围LPS干预浓度和作用时间,RT-PCR法对IL-6、TNF-α、IL-1β、TLR4、My D88、NF-κB p65 mRNA进行半定量检测,Western Blotting法检测TLR4、My D88、NF-κB p65蛋白表达变化,确定最终造模条件。结果:LPS在5、10、100μg/m L浓度时细胞活力<98%,其余浓度均可促进HCASMC生长;0.5、1μg/m L LPS干预24、48h都可显着诱导产生炎性因子IL-6、IL-1β和TNF-α(P<0.05);1μg/m L LPS作用48h可最大程度激活TLR4-My D88炎性反应通路下游因子基因和蛋白表达(P<0.05)。结论:1μg/m L LPS干预HCASMC 48h可保证HCASMC处于持续的高炎性活化状态,可作为热毒生风型络风内动细胞模型的最佳造模条件。(本文来源于《中华中医药杂志》期刊2016年08期）
猪冠状动脉平滑肌细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:研究miRNA-574-5p对冠状动脉平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖的影响及其调控的分子机制。方法:实时定量PCR检测冠心病(coronary artery heart disease,CAD)患者及健康体检者外周血中miRNA-574-5p的表达及正常人VSMCs细胞中miRNA-574-5p及ZDHHC14的表达。MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡。双荧光素酶报告分析检测miRNA-574-5p与靶基因的结合。结果:与正常体检者对比,CAD患者血清中miRNA-574-5p的表达显着增加(P<0.05)。与阴性对照组相比,miRNA-574-5p类似物显着提高VSMCs的增殖(P<0.01),降低VSMCs的凋亡(P<0.01)。经在线miRNA靶基因预测软件分析,miRNA-574-5p的一个靶基因为ZDHHC14。miRNA-574-5p降低ZDHHC14 3'UTR端的荧光素酶活性(P<0.01),且抑制其表达(P<0.01)。ZDHHC14过表达降低miRNA-574-5p诱导的VSMCs的增殖(P<0.05),提高miRNA-574-5p诱导的VSMCs的凋亡(P<0.05)。结论:miR-574-5p通过抑制ZDHHC14表达促进VSMCs增殖,并抑制其凋亡。miR-574-5p可能为CAD相关因子,并可能成为CAD治疗的潜在分子靶点。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
猪冠状动脉平滑肌细胞论文参考文献
[1].陈玉龙,万招飞,刘小军,范佳丽,薛嘉虹.同型半胱氨酸通过YAP通路调控大鼠冠状动脉血管平滑肌细胞高反应性的作用机制研究[J].实用心脑肺血管病杂志.2019
[2].杨晓伟,张拓伟,闫泱锦.MicroRNA-574-5p对冠状动脉平滑肌细胞生长的影响及其调控机制[J].川北医学院学报.2019
[3].陈俭,李传荣,王瑞敏,毛幼林,黄琼.B族Ⅰ型清道夫受体过表达对血小板源性生长因子诱导的冠状动脉平滑肌细胞增殖和迁移的影响[J].新乡医学院学报.2019
[4].刘亚杰.自噬参与心外膜祖细胞向冠状动脉平滑肌细胞分化的实验研究[D].重庆医科大学.2019
[5].张华巍.血流剪切力调控内皮细胞外泌体分泌进而调控冠状动脉平滑肌细胞增殖和迁移[D].中国人民解放军医学院.2018
[6].卢平.尿毒症大鼠冠状动脉平滑肌细胞内钙离子浓度的变化及其机制探讨[D].南昌大学.2018
[7].吴琪.STIM1/Orai1信号通路在高压负荷诱导冠状动脉血管平滑肌细胞异常增殖中的机制研究[D].南昌大学.2018
[8].吴转转.冠状动脉支架植入对血管平滑肌细胞力生长因子及超微结构影响的实验研究[D].锦州医科大学.2018
[9].陈肖燕.毒胡萝卜素诱导冠状动脉血管平滑肌细胞内质网应激模型的建立[C].2017年第五次世界中西医结合大会论文摘要集（中册）.2017
[10].李红梅,王显.基于脂多糖诱导人冠状动脉平滑肌细胞炎性活化的热毒生风型络风内动细胞模型构建[J].中华中医药杂志.2016