论文摘要
采用荧光定量PCR技术(SYBR Green I法)检测了瘦肉型的长白猪和脂肪型的太湖猪的脂肪组织中胰岛素样生长因子2(IGF2)、胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP3)、硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD)和苹果酸酶(ME)基因mRNA丰度在30、60、90、120和150日龄间的表达变化,并分析品种间和不同日龄间基因表达的差异及其对脂肪性状的影响。结果显示:脂肪细胞体积和平均背膘厚在30、60、90、120和150日龄间的变化体现了太湖猪脂肪细胞的肥大作用和沉积脂肪的能力较长白猪强的品种特征。猪脂肪组织IGF2、IGFBP3、SCD和ME基因表达存在明显的发育性变化和品种差异:(1)品种内日龄间的比较表明,长白猪IGF2 mRNA在30日龄时的表达量极显著高于其它日龄(P＜0.01),之后逐渐下降至120日龄为最低,150日龄时又明显上升;太湖猪IGF2 mRNA在30～60日龄的表达量较高,90日龄降至最低,120日龄迅速回升,之后又有所下降。两品种IGFBP3、SCD和ME mRNA表达的发育性变化模式基本相同,具体为:IGFBP3在30日龄时表达量最高,60日龄时显著下降(P＜0.05),之后趋于平缓但略有波动;SCD 30～60日龄的表达量很低,90日龄突然升高,之后维持较高的表达量;ME在30～60日龄的表达量很低,90日龄迅速升高,之后呈缓慢下降趋势。(2)品种间相同日龄的比较表明,120日龄时太湖猪IGF2 mRNA的表达量极显著高于长白猪(P＜0.01);150日龄时太湖猪IGFBP3的表达量极显著低于长白猪(P＜0.01),其余日龄间两品种差异均不显著(P＞0.05)。长白猪SCDmRNA在30日龄时显著低于太湖猪(P＜0.05),60日龄时却极显著高于太湖猪(P＜0.01);30和150日龄时长白猪ME mRNA极显著低于太湖猪(P＜0.01),90日龄时显著低于太湖猪(P＜0.05),但60日龄时却极显著高于太湖猪(P＜0.01),其余日龄间两品种差异不显著(P＞0.05)。
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摘要Abstract1 文献综述1.1 选题背景和意义1.2 胰岛素生长因子2（IGF2）概述1.2.1 IGF2基因的定位和遗传分析1.2.2 IGF2的分子结构1.2.3 IGF2生物学功能1.3 胰岛素生长因子结合蛋白3（IGFBP3）概述1.3.1 IGFBP3基因的定位和遗传分析1.3.2 IGFBP3分子结构1.3.3 IGFBP3生物学作用1.3.4 IGFBP3的作用机制1.4 苹果酸酶（ME）概述1.5 硬脂酰辅酶A去饱和酶（SCD）概述1.5.1 SCD基因的定位和遗传分析1.5.2 SCD在脂质代谢中的调控作用1.6 荧光定量PCR技术1.6.1 荧光定量PCR定量原理1.6.2 荧光定量PCR的分类1.6.3 荧光定量PCR技术的定量方法1.6.4 荧光定量PCR技术的应用1.6.5 荧光定量PCR存在的问题2 材料和方法2.1 实验材料2.1.1 实验动物2.1.2 样品采集2.2 主要仪器设备2.3 实验所需试剂2.4 常用试剂的配制2.5 实验方法2.5.1 胴体性状数据的测定2.5.2 脂肪细胞的形态学观测2.5.3 脂肪组织总RNA的抽提2.5.4 RNA样品的琼脂糖凝胶电泳检测2.5.5 cDNA的合成（Reverse Transcription,RT）2.5.6 PCR引物的设计与合成2.5.7 标准品的制备2.5.8 实时荧光定量PCR2.6 数据处理3 结果与分析3.1 脂肪沉积性状3.1.1 脂肪细胞体积3.1.2 脂肪细胞体积和平均背膘厚的生长发育变化3.2 总RNA提取结果3.3 常规PCR反应的结果3.4 荧光定量PCR结果3.4.1 PCR的扩增曲线和标准曲线3.4.2 扩增产物的特异性3.5 脂肪组织中IGF2、IGFBP3、SCD和ME基因表达的发育性变化3.5.1 品种和日龄及其互作对IGF2、IGFBP3、SOD和ME基因表达的影响3.5.2品种内不同日龄和相同日龄间不同品种对IGF2、IGFBP3、SOD和ME基因表达的影响4 讨论4.1 SYBR GREEN I实时荧光定量PCR4.1.1 SYBR Green I实时荧光定量PCR的优缺点4.1.2 外标准曲线法和多个内参基因的选择4.2 长白猪和太湖猪脂肪细胞体积和背膘厚的发育性变化4.3 IGF2和IGFBP3基因表达的发育性变化4.4 ME和SCD基因表达的发育性变化5 结论6 参考文献致谢附录 常用词语缩写攻读学位期间发表的学术论文
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