论文摘要
目的:Smac蛋白（Second mitochodria-adrived activator of caspase,第二个线粒体源的caspase激活物）是一种由线粒体释放入胞浆的促凋亡调节因子,可解除凋亡抑制蛋白（Inhibitor of apoptosis protein, IAP）家族对Caspase的抑制作用,进而通过常规抗癌药物或靶向死亡的受体介导,发出细胞凋亡信号,从而激活肿瘤细胞的凋亡机制。Smac是目前发现的唯一存在于哺乳动物细胞中直接抑制IAP的蛋白。食管癌是食管鳞状上皮的恶性肿瘤,是人类常见的恶性肿瘤之一。中国是食管癌的高发地区,也是本病死亡率最高的国家之一,年平均死亡率为14.59/10万。发病年龄多在40岁以上,男性多于女性。临床治疗食管癌的方法较多,如手术、放疗、化疗、生物治疗等,但无论哪种治疗方法都有一定的局限性,单用一种方法治疗往往得不到令人满意的疗效。近年来,国内外许多学者对食管癌采取了合理而有计划的综合治疗,期望进一步提高患者治疗后的无病生存期和远期生存率,但总体疗效仍不令人满意。本研究旨在通过检测Smac和Caspase-3在食管鳞状细胞癌中的表达情况,来探讨Smac与Caspase-3对食管鳞状细胞癌发生、发展的影响,为食管癌的临床治疗研究提供科学的理论依据。方法:采用流式细胞分析技术对食管鳞状细胞癌患者的癌组织进行Smac和Caspase-3的计量分析。标本取自河北医科大学第四医院胸外科2000年2002年通过手术治疗的部分食管鳞状细胞癌患者的癌组织和癌旁组织蜡块,癌组织标本75例,男性50例,女性25例,年龄4677岁,平均年龄57岁,根据2002年UICC食管癌国际TNM分期标准:T112例,T223例,T340例,N028例,N147例。以同期39例食管癌旁组织作为对照。用切片机对蜡块标本进行连续切取约40μm厚的组织片3-4片,依次进行脱蜡、水化、消化、过滤、离心、标抗等步骤,最后用流式细胞仪对标抗好的单细胞悬液组织进行流式分析,以PBS液作为阴性对照,只加二抗（FITC）作为阳性对照,检测结果以平均荧光强度（ X±S）或荧光指数（FI）表示。用SPSS13统计软件对检测结果进行统计分析,包括卡方检验、Kruskal walli检验、Mann-Whitney检验、Pearson相关分析等。结果:（1） Smac在不同组织中的表达情况:Smac在食管鳞状细胞癌组织中的阳性表达率为62.7%,在癌旁组织中的阳性表达率为92.3%,两组相比较,有统计学差异性（P<0.05）。（2） Caspase-3在不同组织中的表达情况:Caspase-3在癌组织中的阳性表达率为78.7%,在癌旁组织中的阳性表达率为94.9%,在癌组织和癌旁组织之间存在显著的统计学差异性（P<0.05）。（3） Smac蛋白及Caspase-3蛋白在食管鳞状细胞癌组织中的表达与临床病理特征的关系:食管鳞状细胞癌患者的年龄、性别、肿瘤浸润深度与Smac蛋白及Caspase-3蛋白表达无关;Smac蛋白在食管鳞状细胞癌组织中的表达与淋巴结转移之间无统计学差异（P>0.05）;Caspase-3蛋白在食管鳞状细胞癌组织中的表达与淋巴结转移之间有统计学差异（P<0.05）。（4） Smac与Caspase-3之间的相互关系:癌组织中,Smac的平均荧光强度表达为170.42±79.92,Caspase-3的平均荧光强度表达为200.73±79.03,相关检验其相关系数r=0.735,P<0.01;癌旁组织中,Smac的平均荧光强度表达为271.65±147.76,Caspase-3的平均荧光强度表达为265.24±87.8,相关检验其相关系数r=0.421,P<0.01。结论:（1） Smac和Caspase-3两种蛋白在食管鳞状细胞癌组织中的含量表达均低于它们在癌旁组织中的含量表达。（2） Smac及Caspase-3在食管鳞状细胞癌组织中的表达与患者的年龄、性别、肿瘤的浸润深度无关。Smac蛋白在食管鳞状细胞癌组织中的表达与淋巴结转移无关,而Caspase-3蛋白在食管鳞状细胞癌组织中的表达与淋巴结转移有关,Caspase-3蛋白的高表达可减少食管鳞癌细胞发生淋巴结转移的机率。（3）无论是在癌组织还是在癌旁组织中,Smac和Caspase-3两种蛋白的含量表达关系均呈正相关。当组织中Smac蛋白呈高表达时,Caspase-3蛋白亦呈高表达,反之,Caspase-3蛋白呈现低表达。