嗜热链球菌分离鉴定及性能研究

论文摘要

嗜热链球菌（Streptococcus thermophilus）是一种重要的益生菌,在食品、生物、医疗领域都有很广泛的应用。本课题对从生原乳中分离得到的嗜热链球菌进行研究,研究内容包括：嗜热链球菌的分离纯化与鉴定,嗜热链球菌菌株间遗传多态性的分析,嗜热链球菌生物学性能的研究以及发酵性能的比较,主要研究结果如下：1、从内蒙古、西宁、新疆、西安、武汉这五个地方的生原乳中分离出66株嗜热链球菌,从市售商业产品中筛选出3株,共69株嗜热链球菌,经糖发酵试验,传统表型鉴定以及分子生物学技术鉴定,确定分离得到的菌株为嗜热链球菌。2、应用随机扩增多态性DNA （Randomly Amplified Polymorphic DNA, RAPD）技术和简单重复序列（Simple Sequence Repeats, SSRs）技术两种技术分别对69株嗜热链球菌进行聚类分析,分析结果为在聚类树图中的表现大体一致,均分为2个组别,各个组别下边又分为两个亚组。将STWY系列与STNY系列放在同一组中；对于STNT的分类也相似,将1、2分在一起,其他标号分在一起,并且分属于两个组别；另STXY系列也在两种分类中有共同的部分。两种技术的聚类结果也有细微差别,在RAPD聚类中SS系列与部分STNN菌株在一个亚组中而在SSR的聚类分析中被单独分为一个亚组,STXN系列在RAPD的聚类分析中只存在一个组内,而在SSR的聚类分析中,将其分散开,分在两个组中标号2-6在一个组内,另外的在另一个组中。树图表明这种分组与乳源地域和乳源品质有关。3、69株嗜热链球菌在葡萄糖产酸产气、过氧化氢酶反应、石蕊牛奶、脲酶活性、蛋白水解能力检测中的实验结果具有一致性,结果显示为葡萄糖产酸不产气,接触酶阴性,石蕊牛奶阳性,脲酶活性阴性,蛋白水解能力呈阳性；69株嗜热链球菌中有42株菌含有质粒。4、由发酵时间、乳清析出量、发酵酸度、发酵粘度、活菌数、胞外多糖含量这几个指标对菌株的发酵性能进行比较,选出的优良菌株分别为来自内蒙古牛奶的STNN7、商业菌株SS2和西安羊奶的STXYl5三株菌,在综合性上优于其他菌株。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 缩略语表
• 第一章 文献综述
• 1 研究概述
• 1.1 乳酸菌的应用与研究概述
• 1.2 嗜热链球菌的概述及其研究概况
• 1.3 分子生物学技术在乳酸菌鉴定分析中的应用
• 1.3.1 16SrDNA、16SrRNA基因间隔区（ISR）序列同源性分析
• 1.3.2 限制性片段长度多态性
• 1.3.3 扩增片段长度多态性分析
• 1.3.4 随机扩增多态性DNA技术
• 1.3.5 基因组简单重复序列PCR标记
• 2 本课题研究的目的、意义和主要内容
• 2.1 研究目的与意义
• 2.2 主要研究内容
• 第二章 嗜热链球菌的分离纯化与鉴定
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 2.1 原料
• 2.2 主要仪器设备与试剂
• 2.2.1 主要仪器及设备
• 2.2.2 主要试剂
• 2.3 培养基
• 2.4 实验方法
• 2.4.1 嗜热链球菌的分离纯化
• 2.4.2 嗜热链球菌的糖发酵试验
• 2.4.3 嗜热链球菌的分子鉴定
• 3 结果与分析
• 3.1 嗜热链球菌的分离纯化
• 3.2 嗜热链球菌的糖发酵试验
• 3.3 嗜热链球菌的分子鉴定
• 4 讨论
• 第三章 RAPD技术及SSRs序列在嗜热链球菌亲缘关系上的应用
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 2.1 供试菌株
• 2.2 主要仪器设备与试剂
• 2.2.1 主要仪器及设备
• 2.2.2 主要试剂
• 2.3 培养基
• 2.4 实验方法
• 2.4.1 嗜热链球菌的扩大培养
• 2.4.2 嗜热链球菌DNA的提取
• 2.4.3 RAPD引物及扩增体系
• 2.4.4 RAPD扩增程序及扩增检测
• 2.4.5 RAPD数据处理及聚类分析
• 2.4.6 M13等微卫星序列的扩增引物及扩增体系
• 2.4.7 M13等微卫星序列扩增程序及扩增检测
• 2.4.8 M13等微卫星序列数据处理及聚类分析
• 3 结果与分析
• 3.1 RAPD图谱
• 3.1.1 引物RL4的扩增图谱
• 3.1.3 随机引物RL18的扩增图谱
• 3.1.5 引物RL19的扩增图谱
• 3.3 RAPD树图
• 3.4 微卫星序列引物图谱
• 3.4.1 引物M13的扩增图谱图谱
• 5的扩增图谱'>3.4.2 引物（GTG）₅的扩增图谱
• 5的扩增图谱'>3.4.3 引物（GAC）₅的扩增图谱
• 4图谱'>3.4.4 引物（GACA）₄图谱
• 3.5 微卫星序列引物树图
• 4 讨论
• 第四章 嗜热链球菌生物学性能的比较研究
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 2.1 供试菌株
• 2.2 主要仪器设备与试剂
• 2.2.1 主要仪器及设备
• 2.2.2 主要试剂
• 2.3 培养基
• 2.4 实验方法
• 2.4.1 葡萄糖产酸产气实验
• 2.4.2 接触酶检验
• 2.4.3 石蕊牛奶实验
• 2.4.4 脲酶活性检验
• 2.4.5 蛋白水解能力检测
• 2.4.6 质粒检测
• 3 结果与分析
• 3.1 生物性能实验结果
• 3.2 质粒图谱
• 4 讨论
• 第五章 嗜热链球菌发酵性能的比较
• 1 引言
• 2 材判与方法
• 2.1 供试菌株
• 2.2 主要仪器设备与试剂
• 2.2.1 主要仪器及设备
• 2.2.2 主要试剂
• 2.3 培养基
• 2.4 实验方法
• 2.4.1 凝乳时间的测定
• 2.4.2 乳清析出量的测定
• 2.4.3 发酵粘度的测定
• 2.4.4 发酵酸度的测定
• 2.4.5 活菌数的测定
• 2.4.6 胞外多糖含量的测定
• 3 结果与分析
• 3.1 菌株的发酵性能
• 3.2 嗜热链球菌胞外多糖含量
• 4 小结
• 总结
• 参考文献
• 致谢