牛奶中黄曲霉毒素M1检测方法的建立及饲料中黄曲霉毒素对牛奶品质的影响

论文摘要

黄曲霉毒素是一种来源于自然界中霉菌的毒素,已经被证明为导致人类癌症的一类致癌源。黄曲霉毒素M1则是黄曲霉毒素B1的代谢产物,存在于食用了黄曲霉毒素B1污染饲料的动物的乳中,各国都对乳中黄曲霉毒素M1进行了严格限量。关于黄曲霉毒素B1的预防、去除和解毒的研究工作,显得非常重要。虽然国内外对黄曲霉毒素的去除和解毒进行了大量的研究,可迄今为止还没有一种可供工业上大规模应用的理想的解毒方法。所以,及时对食品中黄曲霉毒素进行定量检测,是目前最大限度地降低黄曲霉毒素危害的最好措施。本研究拟建立起免疫亲和柱—荧光光度法快速测定牛奶中黄曲霉毒素M1的方法。试样经过离心、脱脂、过滤后,滤液经过键合有黄曲霉毒素M1特殊抗体的免疫亲和柱净化,此抗体对黄曲霉毒素M1具有专一的识别能力,黄曲霉毒素M1键合在分离柱中的抗体上。用甲醇与水为10:90的混合液将免疫亲和柱上杂质除去;以甲醇与水之比为80:20的混合液通过分离柱洗脱,加入溴溶液衍生,以提高测定灵敏度。衍生化后的洗脱液于荧光光度计中测定黄曲霉毒素M1。通过选择最佳激发波长和发射波长;对阴性牛奶样品添加特定量的标准样品,进行平行试验,判断该方法的精确度;进行三个水平的标准样品回收率试验;确定检出限。从而评判方法的准确性和精确性。采用免疫亲和柱——荧光光度法检测牛奶中的黄曲霉毒素M1,检测低限为0.01μg/kg,在0.1～1.0μg/kg范围内,回收率为89.6%～96.1%,变异系数为0.52%～5.8%,分析一个样品的时间小于30min,分析过程中不使用黄曲霉毒素M1标准物质。本方法具有准确、简单、快速、安全等特点,可以满足批量样品的检测需要。被检测的青贮料、粗饲料、全混合日粮样品中黄曲霉毒素B1平均含量分别为8.28μg/kg、3.11μg/kg和6.56μg/kg,属于轻度污染。50份奶样中,阳性最高值为0.203μg/kg,阳性最低值为0.003μg/kg,阳性平均值为0.089μg/kg,均符合我国目前的限量标准。奶牛样品中黄曲霉毒素M1与饲料中黄曲霉毒素的污染有关,奶牛通过饲料途径食入的黄曲霉毒素B1,约有1.35%以M1的形式进入乳中。

论文目录

• 致谢
• 摘要
• 第一章 文献综述
• 1 我国奶业发展概况
• 1.1 奶业生产情况分析
• 1.2 鲜乳品市场价格情况分析
• 1.3 乳品进出口贸易情况分析
• 2 安全牛奶
• 3 黄曲霉毒素的危害
• 3.1 黄曲霉毒素的结构、种类及理化性质
• 3.2 AFM1理化特性及产生
• 3.3 AFM1的危害污染现状、防治措施
• 3.4 黄曲酶毒素的限量标准
• 4 黄曲霉毒素的检测方法进展
• 4.1 定性检测方法
• 4.2 半定量检测方法
• 4.3 定量检测方法
• 4.4 免疫化学分析法
• 4.5 免疫化学与仪器分析结合的方法
• 4.6 不同分析方法的比较
• 第二章 牛奶中黄曲霉毒素M1检测方法的建立
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 2.1 测定原理
• 2.2 仪器设备
• 2.3 主要试剂及配置
• 2.4 分析步骤
• 3 结果与分析
• 3.1 最佳激发波长和发射波长的选择
• 3.2 方法性能
• 4 讨论与结论
• 4.1 免疫亲和柱的原理
• 4.2 免疫亲和柱的选择
• 4.3 免疫亲和柱荧光光度法
• 第三章 饲料中黄曲霉毒素对牛奶品质的影响
• 1 样品采集
• 2 分析方法
• 3 结果与分析
• 4 结论与讨论
• 第四章 结语
• 1 主要结论
• 2 需要进一步解决的问题
• 参考文献
• ABSTRACT