间充质干细胞的分离培养及其横向诱导分化为角膜上皮细胞的实验研究

论文摘要

目的探索体外分离、培养和扩增人骨髓间充质干细胞的方法。并且使用特殊的诱导培养基对间充质干细胞进行诱导培养,检测其是否表达角膜上皮细胞的特殊标记物,探讨间充质干细胞在体外向角膜上皮细胞横向分化的可能性,为眼科临床中治疗角膜上皮细胞和角膜缘干细胞的缺乏或功能紊乱提供新思路。方法取胎龄为3～5 月的流产胎儿骨髓和无恶性血液病的32～65 岁的成人骨髓各7 例,缓慢加入4～6ml 淋巴细胞分离液中,以2500rpm 的速度离心25mim,吸取含单核细胞的灰白色液体层,用PBS 清洗2 次,加入含体积分数为10%的胎牛血清（FBS）的DMEM/F12 培养液,将胎儿骨髓来源细胞的密度调整到5×105个/ml,成人骨髓来源细胞的密度调整到1×106个/ml,接种到12 孔培养板中（1 ml/孔）,放在37℃、含体积分数为5%的CO2的饱和湿度培养箱中培养,48 h 后更换新鲜培养液,以后每3 d 换液1 次。当细胞铺满培养板底90%以上时,按如下方法进行细胞传代培养:去除培养液,PBS冲洗3 次,用含0.02%EDTA 的0.25%胰蛋白酶室温下消化3～5min,见细胞松动浮起时,FBS 终止消化,PBS 清洗3 次,加入含体积分数为10%FBS 的DMEM/F12 培养液,调整细胞浓度到2×104个/ml,接种于25cm2培养瓶中,5ml/瓶,放在37℃、含体积分数为5%的CO2的饱和湿度培养箱中培养,每3 d 换液1 次。用流式细胞术检测培养细胞的CD29、CD44、CD166、CD105、CD34、CD45、HLA-DR 表达情况。取第5 次传代的成人骨髓MSCs,接种于有盖玻片的12 孔培养板内（细胞数为2×104 个/ 孔）,分别加入以下5 种混合培养基进行培养,每种加2 孔:（1）DMEM/F12、10%FBS;（2）DMEM/F12、10%FBS、

论文目录

• 一、中文摘要
• 二、英文摘要
• 三、前言
• 四、材料与方法
• 五、结果
• 六、讨论
• 七、结论
• 八、参考文献
• 九、致谢
• 十、综述
• 参考文献