全反式维甲酸与奥沙利铂在诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡中的协同作用

论文摘要

胃癌是常见的恶性肿瘤,在世界范围内最常见的恶性肿瘤中占第4位,死亡率占所有恶性肿瘤的第2位。在我国胃癌发病率和死亡率分别占恶性肿瘤的第1位和第3位。针对胃癌的治疗药物也层出不穷,短期内显示出良好的临床疗效。然而大规模的随访研究结果表明,肿瘤患者的远期生存率并没有因为化疗药物的使用而得到显著提高,而且有些化疗药物严重的毒副作用限制了它们在临床上的应用。探索低剂量多药联合应用,是肿瘤药物研究的一个重要方向。全反式维甲酸（all-trans retinoic acid, ATRA）是维生素A的主要代谢产物,是维持生长发育不可缺少的物质,是一种公认的诱导分化剂。奥沙利铂（Oxaliplatin, L-OHP）是第三代铂类抗癌化合物,主要用于晚期大肠癌的治疗。由于其与第一代顺铂和第二代卡铂均无交叉耐药性,并且耐受性好、毒副作用小,因而受到广泛重视。ATRA与L-OHP联合作用于胃癌是否能够提高疗效,目前未见报道。本实验从体外细胞学角度观察全反式维甲酸（ATRA）与奥沙利铂（L-OHP）对人胃癌BGC-823细胞凋亡的诱导作用,从而为进一步研究提供理论基础。1.用ATRA和L-OHP单独及联合作用于BGC-823细胞,倒置显微镜下观察细胞形态变化；2.采用MTT法检测ATRA及L-OHP分别作用24h、48h、72h后BGC-823细胞的增殖抑制率；3.采用流式细胞仪检测ATRA及L-OHP作用48h后BGC-823细胞的凋亡率及周期变化；4.采用免疫细胞化学技术检测ATRA及L-OHP作用48h后BGC-823细胞中Bcl-2和Survivin蛋白的表达情况。1.药物作用24h后,细胞间隙增宽,胞内颗粒增多,出现空泡；作用48h后,多数细胞漂浮于培养液中,少量细胞仍贴壁生长,并可见部分细胞的细胞核固缩、断裂成碎片、核膜消失,细胞膜完整且有突起,呈凋亡晚期改变；作用72h后,凋亡细胞数量逐渐增多。随着作用时间的延长,与对照组相比,实验组细胞碎片数量明显增多,贴壁细胞数量显著减少。2. ATRA对BGC-823细胞的抑制作用呈现时间依赖性,24h后对细胞的抑制作用不显著,48h和72h后抑制作用相对明显,与对照组相比差异有统计学意义（P<0.05）。联合用药后抑制作用更加显著,与ATRA组及L-OHP组相比差异有统计学意义（P<0.05）,最佳作用时间为加药后48h。3. ATRA作用细胞后,G0/G1期和G2/M期的细胞比率增加,S期的细胞比率下降；L-OHP作用细胞后,G0/G1期的细胞比率下降,S期和G2/M期的细胞比率增加；联合用药后G0/G1期和G2/M期的细胞比率增加,S期的细胞比率下降；联合用药组与ATRA组、L-OHP组相比,凋亡率差异均有统计学意义（P<0.05）。4.对照组中可以见到细胞质中较多的Survivin蛋白和Bcl-2蛋白表达,呈浅黄色到棕黄色颗粒。ATRA组和L-OHP组阳性表达细胞数减少,而联合用药组的细胞表达数更少。联合用药组与ATRA组、L-OHP组相比,蛋白阳性率差异均有统计学意义（P<0.05）。1. ATRA对人胃癌BGC-823细胞存在增殖抑制作用,且具有时间依赖性,最佳作用时间为48h,与L-OHP联用后对BGC-823细胞的增殖抑制作用更显著。2. ATRA可诱导人胃癌BGC-823细胞分化,形成G0/G1期阻滞；L-OHP可促进细胞凋亡,形成G2/M期和S期阻滞。两者联用可发挥协同作用,加强对BGC-823细胞凋亡的促进作用。3. ATRA与L-OHP可诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡,机制可能与下调Bcl-2蛋白和Survivin蛋白的表达有关。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 全反式维甲酸与奥沙利铂在诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡中的协同作用
• 前言
• 材料与方法
• 1 实验材料
• 1.1 细胞系
• 1.2 药物
• 1.3 主要试剂
• 1.4 主要仪器
• 1.5 主要药物的配制
• 1.6 主要试剂的配制
• 2 实验方法
• 2.1 细胞培养
• 2.2 倒置显微镜下观察细胞形态学变化
• 2.3 MTT实验检测细胞生长抑制率
• 2.4 流式细胞术检测细胞周期和凋亡
• 2.5 免疫细胞化学法检测Survivin蛋白和Bcl-2蛋白
• 3 统计学处理
• 实验结果
• 1 倒置显微镜下观察细胞形态变化
• 2 ATRA及L-OHP对BGC-823细胞的生长抑制作用
• 3 ATRA及L-OHP对BGC-823细胞周期及细胞凋亡的影响
• 4 ATRA及L-OHP对BGC-823细胞Bcl-2蛋白和Survivin蛋白表达的影响
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 全反式维甲酸用于恶性肿瘤治疗的研究进展
• 1 ATRA的生物学特性
• 1.1 维甲酸的基本结构和功能
• 1.2 维甲酸的代谢及结合蛋白
• 1.3 维甲酸的受体
• 1.4 维甲酸信号传导途径及调控
• 2 ATRA用于恶性肿瘤治疗的研究现状
• 2.1 血液系统恶性肿瘤
• 2.2 消化系统恶性肿瘤
• 2.3 呼吸系统恶性肿瘤
• 2.4 其他恶性肿瘤
• 3 ATRA作用机制的研究
• 3.1 ATRA通过诱导细胞分化抑制增殖诱导凋亡
• 3.2 ATRA通过细胞周期阻滞诱导凋亡
• 3.3 ATRA通过影响肿瘤基因的表达诱导凋亡
• 3.4 其他作用机制
• 4 ATRA应用过程中存在的问题及展望
• 参考文献
• 英文缩略词索引
• 致谢
• 个人简历