中国卤虫trh和APH-1基因的序列分析及在不同发育时期的表达

论文摘要

中国卤虫（Artemia sinica）属于节肢动物门（Phylum Arthropoda）,甲壳纲（ Class Crustacea）,鳃足亚纲（ Subclass Branchiopoda ）,无甲目（ Order Anostaca ）,卤虫科（ Family Artemiidae）,卤虫属（Genus Artemia）。主要分布于山西、西藏、新疆、青海、内蒙等内陆盐湖、盐井等高盐水体中,于是渗透调节就成了维持其生存的一个重要方面。在卤虫发育的不同阶段,其渗透调节功能也分别由不同的组织器官来完成,在无节幼体期主要由盐腺来完成,在拟成虫期和成虫期则主要有胸部的附肢来完成。本文根据GenBank上美国卤虫trh基因的mRNA序列设计引物,以中国卤虫总RNA为模板,经RT-PCR,得到了长782bp的基因片段,经Blastn比对、ClustalX 1.83软件和MEGA 3.0对该序列的假定氨基酸序列和相近蛋白的氨基酸序列进行分子进化分析,确认该序列是中国卤虫trh基因的部分序列,构建的进化树显示它和美国卤虫的trh亲缘关系最近;利用这一片段设计探针,对不同发育时期的中国卤虫进行整体原位杂交,发现在无节幼体前期、无节幼体期和无节幼体后期,trh在中国卤虫的盐腺中表达,同时在无节幼体后期的胸肢芽中也有微弱表达,而在拟成虫期和成虫期则在中国卤虫胸部的附肢中表达,推测trh基因可能对卤虫的渗透调节有重要作用。根据GenBank上美国卤虫APH-1基因的mRNA序列设计引物,以中国卤虫总RNA为模板,经RT-PCR,得到了长792bp的序列,经blast比对、Clustal X 1.83软件和MEGA3.0软件进行对中国卤虫APH-1基因假定氨基酸序列和相近的氨基酸序列分子进化分析,确认它与美国卤虫的APH-1相似性最高,是中国卤虫APH-1基因的部分序列;利用这一片段设计探针,对不同发育时期的中国卤虫进行整体原位杂交,发现在无节幼体前期、无节幼体期和无节幼体后期,APH-1在中国卤虫的盐腺中表达,而在拟成体期和成体期没有表达,推测APH-1基因可能对卤虫的渗透调节和盐腺发育有重要作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1. 前言
• 1.1 卤虫的分类地位、生物学特征和分布
• 1.2 卤虫生物学研究进展
• 1.2.1 卤虫分类学及群体遗传学研究进展
• 1.2.2 卤虫发育相关基因研究进展
• 1.3 trh 基因和 APH-1 基因相关研究工作
• 1.3.1 trh 基因相关研究工作
• 1.3.2 APH-1 及其同源基因相关研究工作
• 1.4 组织原位杂交技术概述
• 1.4.1 组织原位杂交技术的基本原理
• 1.4.2 组织原位杂交技术的发展历史
• 1.4.3 RNA 原位杂交的应用
• 1.4.4 整体荧光原位杂交技术
• 2. 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 卤虫孵化及培养条件
• 2.1.2 主要试剂
• 2.1.3 主要仪器
• 2.2 方法
• 2.2.1 总 RNA 的提取纯化、RT-PCR 和序列比对
• 2.2.2 整体荧光原位杂交
• 3. 结果
• 3.1 总RNA的质量
• 3.2 引物和实验条件筛选
• 3.3 测序结果和序列分析
• 3.3.1 测序结果
• 3.3.2 序列分析
• 3.3 中国卤虫幼体整体荧光原位杂交（WFISH）结果
• 3.3.1 整体荧光原位杂交条件
• 3.3.2 中国卤虫trh 基因整体荧光原位结果
• 3.3.3 中国卤虫 APH-1 基因整体荧光原位结果
• 4. 讨论
• 4.1 中国卤虫trh 基因和 APH-1 基因的序列及进化分析
• 4.1.1 中国卤虫trh 基因序列及进化分析
• 4.1.2 中国卤虫 APH-1 基因序列及进化分析
• 4.2 中国卤虫trh 基因和 APH-1 基因的表达
• 4.2.1 中国卤虫trh 基因在不同发育时期的表达
• 4.2.2 中国卤虫 APH-1 基因在不同发育时期的表达
• 4.3 实验条件的优化
• 4.3.1 总RNA 的质量、引物的设计和 RT-PCR 条件的优化
• 4.3.2 整体荧光原位杂交（WFISH）条件的优化
• 5. 结论
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历
• 论文发表情况