乙酰甲胺磷对尾草履虫和绿草履虫的毒理学研究

乙酰甲胺磷对尾草履虫和绿草履虫的毒理学研究

论文摘要

人类生存的环境中有着大量的农药残留,对环境和生物的破坏是多方面的,目前关于动物毒性试验的监测报道较多,对其毒性机理研究局限于高等动物类群,对水体中原生动物这些非靶标生物的毒理机理报道甚少。乙酰甲胺磷是一种安全性较高的有机磷农药,对水体中的原生动物类群的生理、行为、繁殖等方面的影响机制尚未阐明,以草履虫为生物材料研究乙酰甲胺磷的对其各层次的影响,以期对农药毒性进行分析和评价提供证掘,对深入了解动物细胞水平毒性影响的内在机制等理论问题也具有重要的科学意义。1原生动物自动计数软件的开发和实现传统的原生动物计数方法很难准确地计算出活的原生动物个数。为了提高计数效率并减小计数误差,本文采用数字图像处理技术,将连续拍摄的两幅或多幅照片,经过图像相减、增强、滤波以及二值化等图像处理技术,转换为一幅黑白图像。再使用连通区域的标号和统计修正等方法,自动计算出图中的原生动物个数。该系统已被成功使用于草履虫等纤毛类原生动物的种群动态变化、存活率等定量研究,得到了比人工计数更为准确和更高效的实验结果。2乙酰甲胺磷急性致死毒性作用和半致死浓度的确定(1)急性致死作用暴露于乙酰甲胺磷溶液中的尾草履虫和绿草履虫,随着溶液浓度的升高存活时间逐渐变短,其运动行为受到严重影响。浓度在5mg/L-25mg/L范围内,虫体首先快速运动,运动方式除了直行和轴向旋转的正常运动之外,以自身中心旋转运动的速度迅速提高,随后运动速度逐渐减缓。浓度在35mg/L-65mg/L范围内,尾草履虫虫体接触到药液后其运动速度即迅速下降,随之伸缩泡和食物泡破裂,其内容物与细胞质混合,整个细胞容积变大,细胞膜接着破裂,细胞内容物逐渐溢出到细胞外侧,逐渐破裂、溶解。较高浓度下草履虫的迅速产生的行为变化以及形态变化能够很好的反应出乙酰甲胺磷对水生生物的急性毒性影响。(2)半致死浓度的确定测定了尾草履虫和绿草履虫1h和12h半致死浓度LC50,回归分析表明死亡概率单位与浓度对数之间存在着线性关系。1h和12h尾草履虫半致死浓度前者较高。因此绿草履虫对药物耐受力要比尾草履虫更低,其对乙酰甲胺磷的敏感度更高。实验结果证实草履虫能快速而又较为直观的反映农药毒性,可以作为一种评价水环境污染较为理想的指示生物。3乙酰甲胺磷慢性毒性作用下其种群增长的变化应用ACPS系统计数方法来研究种群变化动态变化。在慢性毒性作用下,每个浓度下草履虫种群增长均呈现“S”型曲线。对照组尾草履虫和绿草履虫种群增长达最大值(即稳定期)的时间不同,尾草履虫约11天,绿草履虫较长约13天。随着药物浓度增加,其时间越来越短。记录了5个梯度下,达到稳定增长期时尾草履虫和绿草履虫的种群最高密度。因此,随着乙酰甲胺磷浓度递增,尾草履虫最大种群密度呈递减趋势,浓度的增高抑制着草履虫的繁殖从而制约了草履虫种群密度的增大。绿草履虫的种群增长情况则有所不同,虽然其总趋势也表现出类似的特征,但是,当浓度为0.005mg/L时,其种群密度1532个/mL略大于对照组(1490个/mL)。4乙酰甲胺磷慢性毒性作用下对草履虫个体特征的影响(1)形态学变化在乙酰甲胺磷5个浓度梯度下培养10天,测量结果显示,尾草履虫的长度随浓度增加逐渐变短,而宽度要比对照组宽,随着浓度升高宽度逐渐变短;绿草履虫的长度与宽度明显逐渐变小。尾草履虫和绿草履虫的长、宽度变化均与乙酰甲胺磷浓度之间线性关系。乙酰甲胺磷对草履虫的慢性毒性明显导致了其个体形态和大小的变化。(2)伸缩泡收缩活动的变化暴露于乙酰甲胺磷药液的草履虫其伸缩泡收缩频率的变化非常明显而普遍。数据表明,随着浓度的升高尾草履虫伸缩泡收缩频率依次降低;每个浓度下20分钟后收缩频率明显高于暴露10分钟的结果(对照组除外)。推测,草履虫伸缩泡的活动受到了明显的影响,随着时间延长,其收缩频率略有增加。暴露时间比较的结果来看,草履虫在农药胁迫下逐渐调整和适应,朝着恢复原来收缩频率的方向发展。另一方面乙酰甲胺磷药液的草履虫其伸缩泡收缩频率的变化提示伸缩泡活动变化可以作为快速、高效评价杀虫剂的一个有效方法。(3)糖代谢的变化本研究利用毛细管电泳技术分析了乙酰甲胺磷5个浓度梯度下尾草履虫和绿草履虫匀浆后的糖的含量。结果表明,对照组尾草履虫的葡萄糖含量最高,随着乙酰甲胺磷浓度的升高其葡萄糖含量逐渐降低,实验中未检测到麦芽糖的含量。绿草履虫除了0.005mg/L浓度下的两种糖的含量均比对照组略高之外,随药物浓度升高其葡萄糖和麦芽糖的含量都存在着降低趋势,在0.25mg/L浓度下,其葡萄糖含量最低,麦芽糖的含量几乎检测不到。两者比较来看,同样是对照组或者同样药物浓度胁迫下,绿草履虫的葡萄糖含量均高于尾草履虫的含量,可能是由于种间差异所致。另外,麦芽糖的含量降低趋势与葡萄糖含量降低趋势相同。绿草履虫中麦芽糖的含量随着药物浓度的升高而降低(0.005mg/L除外),这项指标反映了药物胁迫下麦芽糖代谢途径方面产生了影响。(4)绿草履虫中共生藻数量的变化普通光镜和荧光显微镜下枪测乙酰甲胺磷较低浓度下绿草履虫中共生藻生长的毒性作用。不同浓度下培养草履虫,小球藻的数量存在差异,在0.005mg/L低浓度下,小球藻数量明显要比对照组多,当浓度在0.01mg/L、0.05mg/L、0.25mg/L浓度下,随着药液浓度的递增,小球藻数量越来越少,以至于在0.25mg/L浓度下小球藻几乎消失殆尽。据此推断,乙酰甲胺磷对小球藻的慢性毒性影响导致小球藻数量的减少。(5)超微结构的变化透射电镜观察,实验组在0.005mg/L和0.25mg/L的药物浓度下,尾草履虫超微结构表膜结构被破坏,刺丝泡囊明显较大。实验组线粒体出现电子密度较浅,基质腔隙变大或模糊,嵴的结构很难分辨,提示线粒体的功能毒性作用下受到了影响。实验组高尔基体和内质网大量出现,据此认为毒性影响还表现在这些重要胞器方面,从而影响了其生长和种群数量的增长。绿草履虫表膜、表膜泡、刺丝泡和线粒体的超微结构未见异常,实验组(0.005mg/L)小球藻的数量要比对照组明显增加,而实验组(0.25mg/L)小球藻数量却大大减少。而且发现实验组(0.005mg/L)小球藻处于分裂状态的数量也比对照组多,实验组中可以观察到正在消解的小球藻,其围藻泡空隙占据整个小球藻的大部分空间。这与荧光显微镜下小球藻显示的数量结果是吻合的,结合毛细管电泳方法糖的含量测定结果可以推断:乙酰甲胺磷对小球藻的慢性毒性影响导致小球藻数量的减少,由于小球藻与绿草履虫的共生作用,小球藻为绿草履虫的生长提供糖类等产物,小球藻数量的减少也进一步导致绿草履虫的毒性效应加剧。5小结与结论本研究开发了原生动物自动计数软件(ACPS),该系统提高了实验准确度和实验效率,解决了原生动物快速定量研究的方法学问题。利用该软件定量研究了急性毒性致死作用、半致死浓度的确定、种群增长的动态变化等方面:随着药物溶液浓度的升高草履虫存活时间变短;运动行为受到严重影响;测定了尾草履虫和绿草履虫1h和12h半致死浓度LC50;同时发现,尾草履虫耐药能力比绿草履虫略高。在慢性毒性作用下,草履虫最大种群密度呈递减趋势;乙酰甲胺磷慢性毒性作用下对草履虫个体特征的影响表现在形态学、伸缩泡行为、糖代谢、共生藻数量和超微结构多个方面。乙酰甲胺磷对草履虫个体的毒性影响机理,可以根据结构的变化进一步推断,尾草履虫的表膜结构被破坏、刺丝泡囊明显较大、高尔基体和内质网大量出现。实验组(0.25mg/L)小球藻数量却大大减少,小球藻处于分裂状态的数量也比对照组多,围藻泡空隙变大等系列变化从根本上改变了草履虫的生理、行为和增殖。另外,浓度为0.005mg/L时绿草履虫种群密度略高于对照组绿草履虫,而电镜下(0.005mg/L)小球藻的数量比对照组明显增加,这与荧光显微镜下显示的结果是吻合的,结合毛细管电泳方法关于糖含量测定结果可以推断:环境中微量的乙酰甲胺磷不会对小球藻的繁殖造成抑制反而对其具有促进作用。原生动物是单细胞个体,它们与环境物质直接接触,环境条件的微小变化都会导致其形态、结构、行为等的迅速变化,实验结果证实草履虫能快速而又较为直观的反映农药毒性,可以作为一种评价水环境质量较为理想的指示生物。本文的工作为研究乙酰甲胺磷对环境中非靶标生物的毒性作用提供了较详细的毒理学资料,所得结果对阐明乙酰甲胺磷对草履虫等纤毛虫的毒理机制,深入探讨纤毛虫在农药的环境评价方面等具有学术意义。

论文目录

  • 中文摘要
  • Abstract
  • 第一章 有机磷农药的毒理学研究概述
  • 1 有机磷农药的概述
  • 2 有机磷农药的毒性研究进展
  • 3 甲胺磷、乙酞甲胺磷在农业中的应用
  • 4 农药对环境造成的影响
  • 5 乙酞甲胺磷对原生动物的毒理学研究
  • 第二章 基于图像处理的原生动物自动计数方法及其实现
  • 摘要
  • 1 原生动物计数硬件系统
  • 2 原生动物图像的识别
  • 3 原生动物计数
  • 4 系统实现与实验结果
  • 5 结论和讨论
  • 第三章 乙酰甲胺磷对草履虫急性毒性作用与半致死浓度的确定
  • 第一节 乙酰甲胺磷对草履虫的急性毒性作用
  • 第二节 乙酰甲胺磷对草履虫的半致死浓度的确定
  • 第四章 乙酰甲胺磷慢性毒性作用下草履虫种群增长的动态变化
  • 摘要
  • 1 材料
  • 2 实验方法
  • 3 仪器
  • 4 结果与讨论
  • 第五章 乙酰甲胺磷慢性毒性作用下对草履虫个体特征影响
  • 第一节 草履虫慢性毒性作用下的形态变化
  • 第二节 尾草履虫慢性毒性作用下伸缩泡收缩活动的变化
  • 第三节 草履虫慢性毒性作用下糖代谢的变化
  • 第四节 绿草履虫慢性毒性作用下共生藻数量的变化
  • 第五节 草履虫慢性毒性作用下超微结构的变化
  • 参考文献
  • 致谢
  • 相关论文文献

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