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1.基于核酸适配子的慢性粒细胞性白血病K562细胞检测方法的构建及对慢粒诊断价值的初步研究 2.细胞色素P450 2C19基因多态性与氯吡格雷抗血小板作用相关性的Meta-分析

2020-12-11阅读(983)

1.基于核酸适配子的慢性粒细胞性白血病K562细胞检测方法的构建及对慢粒诊断价值的初步研究 2.细胞色素P450 2C19基因多态性与氯吡格雷抗血小板作用相关性的Meta-分析

论文摘要

目的建立一种基于ssDNA适配子的慢性粒细胞白血病K562细胞的检测方法以及初步研究其临床诊断价值。方法利用cell-SELEX技术获得的针对K562细胞的ssDNA核酸适配子为材料,分别与1×106个对数生长期K562、HL-60、NB4细胞结合,通过检测荧光强度值判定适配子特异性；再设定不同核酸适配子浓度结合K562细胞,用SigmaPlot软件,根据公式Y=BmaxX/（Kd+X）做非线性回归分析得到适配子与K562细胞之间Kd值；用蛋白酶K处理K562细胞后与核酸适配子结合,初步探讨适配子结合物质的属性及可能成分；以“双位点结合试验”模式为原理,结合生物素-链霉亲和素磁珠分离技术,建立高特异性高灵敏度检测K562细胞的方法；收集临床慢粒标本,采用构建方法检测慢粒标本,初步研究其临床诊断价值。结果特异性实验结果显示：K562组与HL-60、NB-4组之间荧光强度值差异非常显著（p<0.01）,具有统计学意义；HL-60组与空白对照组之间差异不显著（p>0.01）,差异无统计学意义,通过cell-SELEX技术获得的慢性粒细胞性白血病K562细胞核酸适配子能够从分子水平识别K562、HL-60和NB-4细胞,具有高度的特异性；利用软件做非线性回归分析计算得到核酸适配子1-5与慢性粒细胞白血病K562细胞结合的Kd值分别为：（0.50±0.12）、（0.51±0.13）、（0.52±0.13）、（0.50±0.12）和（0.49±0.12）μM；经蛋白酶K消化处理后,结果显示：处理前后细胞与核酸适配子的结合荧光强度值存在显著性差异（p<0.01）,差异具有统计学意义,提示适配子结合的细胞膜表面物质可能含有蛋白成分。利用构建的方法用不同适配子组合分别检测K562细胞,结果显示：序列没有同源性且亲和力较高的核酸适配子组合能够较灵敏的捕获检测体系中的K562细胞,检测阈值低,灵敏度高；临床初步应用研究结果显示：用筛选荧光强度最高的适配子组合检测,绘制ROC曲线,曲线下面积为0.677,通过临床检验方法性能评价相关指标计算得到敏感性为83.33%和特异性为50%。结论已成功构建基于核酸适配子的检测K562细胞的新方法,为慢性粒细胞性白血病的分子诊断提供一种新方法,也为分离K562细胞表面物质和其他肿瘤细胞的检测、分子成像提供了一种新思路、新策略,但在临床实际诊断应用中有一定的局限性。目的：由于药物氯吡格雷须经肝细胞色素P450代谢后才能发挥抗血小板作用,因此,我们利用Meta-分析的方法,综合评估氯吡格雷抗血小板效果和细胞色素P450 2C19基因（CYP2C19）多态性之间的相关性。方法：计算机检索直到2010年7月CNKI、万方、VIP、中国生物医学文献数据库、Cochrane library、SCI、EMBASE和PubMed数据库,并手工检索相关杂志,各文献满足研究方法相似,有综合的考察统计指标。排除不符合纳入标准,未涉及CYP2C19多态性和氯吡格雷关系的研究。收集有关使用氯吡格雷病人细胞色素CYP2C19基因A/G位点多态性的基因频率和抗血小板效应的独立病例对照研究。在评价纳入研究文献质量,提取有效的数据后,采用RevMan 5.0软件进行Meta分析。结果：共纳入8个病例对照研究,包括1538例GG基因型患者和4413例GA或者AA患者。Meta分析结果表明：使用氯吡格雷作为抗血小板药物的患者中,CYP2C19突变型（GA或者AA）携带者与野生型GG携带者之间在药物敏感性方面相比,前者比后者较差[OR=0.23,（95%可信区间（CI）：0.13—0.40）]；血浆药物浓度前者远低于后者[OR=-17.38,（95% CI：-25.59—-9.16）]；氯吡格雷血小板反应指数前者较后者明显降低[OR=14.35,（95% CI：2.92—-25.77）]；明确的支架植入后血栓形成情况前者较后者有明显增加[OR=3.58,（95% CI：2.116.08）]；由于血栓导致的死亡率前者也较后者增高[OR=3.68（95% CI：1.87—7.43）]；然而,对于发生心肌梗死的情况前者与后者之间无差异[OR=1.25（95% CI：0.96—1.64）]。结论：我们的meta分析结果表明：CYP2C19基因多态性与氯吡格雷药物反应作用之间存在着一定的相关性,且易导致由于血小板凝集而造成的患者死亡。

论文目录

  • 第一部分 基于核酸适配子的慢性粒细胞性白血病K562细胞 检测方法的构建及对慢粒临床诊断价值的初步研究
  • 中文摘要
  • Abstract
  • 1 前言
  • 1.1 核酸适配子与SELEX
  • 1.2 核酸适配子的特点
  • 1.3 核酸适配子与靶物质的结合模式
  • 1.4 核酸适配子在检测领域的研究现状
  • 1.5 生物素-链霉亲和素和磁分离技术
  • 1.6 本研究的构想及意义
  • 2 实验部分
  • 2.1 细胞及细胞株
  • 2.2 试剂与材料
  • 2.3 单链DNA（ssDNA）适配子及引物的合成
  • 2.4 细胞培养
  • 2.5 核酸适配子扩增及修饰标记
  • 2.6 慢性粒细胞白血病K562细胞核酸适配子的性能研究
  • 2.7 构建基于核酸适配子的慢性粒细胞白血病K562细胞检测方法
  • 2.8 技术路线
  • 2.9 核酸适配子检测方法在慢粒中诊断价值的初步研究
  • 3 结果与分析
  • 3.1 含核酸适配子质粒PCR结果
  • 3.2 PCR产物胶回收结果
  • 3.3 不对称PCR生物素标记核酸适配子结果
  • 3.4 荧光素标记核酸适配子结果
  • 3.5 胶回收和磁珠分离制备ssDNA核酸适配子
  • 3.6 慢性粒细胞白血病K562细胞核酸适配子的性能研究
  • 3.7 构建基于核酸适配子的慢性粒细胞白血病K562细胞检测方法
  • 3.8 核酸适配子检测方法在慢粒中诊断价值的初步研究
  • 4 讨论与展望
  • 5 结论
  • 参考文献
  • 缩略词表
  • 第二部分 细胞色素P450 2C19基因多态性与氯吡格雷抗血小板作用相关性的Meta-分析
  • 中文摘要
  • Abstract
  • 1 前言
  • 2 资料与方法
  • 2.1 文献检索
  • 2.2 纳入与排除标准
  • 2.3 质量评价
  • 2.4 资料提取
  • 2.5 统计学方法
  • 3 结果
  • 3.1 纳入研究对象的基线
  • 3.2 Meta分析结果
  • 4 讨论
  • 5 结论
  • 参考文献
  • 在学期间的研究成果
  • 致谢

    • 相关论文文献

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    1.基于核酸适配子的慢性粒细胞性白血病K562细胞检测方法的构建及对慢粒诊断价值的初步研究 2.细胞色素P450 2C19基因多态性与氯吡格雷抗血小板作用相关性的Meta-分析
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