复合微生态制剂的研制及其对反刍动物免疫机能的影响

论文摘要

微生态制剂具有无毒副作用、无残留和不产生抗药性等优点,成为抗生素的替代品,是当前国内外研究的热点。大量研究表明,乳酸菌、芽孢杆菌产生的有机酸及其代谢产物对一些病原菌有抑制作用,并能激活免疫活性细胞,增强机体免疫力;酵母培养物营养丰富,可促进有益菌的生长、抑制病原菌的繁殖,提高机体免疫能力,并对防治畜禽消化道系统疾病起到有益作用。本课题选择对机体免疫力有增强作用的乳酸菌、芽孢杆菌、酵母菌制成复合微生态制剂,验证其对反刍动物免疫机能的影响,为微生态制剂的研究与开发及在反刍动物中的应用提供科学依据。本课题将枯草芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、粪肠球菌、啤酒酵母、酿酒酵母和产朊假丝酵母作为预选菌株,进行相互拮抗性试验、毒性试验、耐酸耐胆盐试验、拮抗病原菌试验,筛选对反刍动物消化道胃酸及胆盐耐受力强、且拮抗常见病原菌的菌株。进一步对筛选出菌株的培养基组分及发酵条件进行优化,采用固体混合发酵法制备复合微生态制剂。饲喂试验中,试验组绵羊的基础日粮中添加5%的复合微生态制剂,42天后采血,进行吞噬细胞的吞噬功能和口蹄疫效价测定。研究结果表明:七株预选菌株相互均不拮抗且对动物安全可靠,对酸性环境有一定的耐受性,其中枯草芽孢杆菌、嗜热链球菌、粪肠球菌、酿酒酵母和产朊假丝酵母对胆盐的耐受力较强,且对大肠杆菌、金黄葡萄球菌均有不同程度的抑制作用;故选择这五株菌为研制复合微生态制剂的理想菌株。筛选出的固体发酵培养基组分为:麸皮60%、豆粕20%、玉米粉15%、葡萄糖2%、明胶3%。发酵条件优化结果为:发酵温度34.5℃;发酵时间28h;接种顺序先接种嗜热链球菌、粪肠球菌、酿酒酵母、产朊假丝酵母发酵6h,再接种枯草芽孢杆菌发酵22h;接种量均为5%,制剂干燥温度为55℃,室温下避光保存,保存期不超过60d。吞噬调理试验结果表明,加入试验组羊全血后,大肠杆菌、金黄色葡萄球菌菌落数较对照组明显减少,表明饲喂本制剂能提高绵羊吞噬细胞的吞噬功能,进而增强动物机体免疫功能及抗病能力;口蹄疫效价测定结果表明,试验组绵羊循环血液中的口蹄疫抗体效价高于对照组,表明本制剂能提高反刍动物循环血液中的抗体水平,对体液免疫有增强作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 引言
• 1.1 微生态制剂的概述
• 1.2 动物微生态制剂菌种的选择标准
• 1.3 可用于生产动物微生态制剂的菌种
• 1.4 微生态制剂的分类
• 1.4.1 根据微生态制剂的物质组成划分
• 1.4.2 根据微生态制剂所用有益菌的种类划分
• 1.5 微生态制剂的作用机理
• 1.5.1 调整微生态平衡
• 1.5.2 有助于厌氧菌繁殖
• 1.5.3 生物拮抗作用
• 1.5.4 增强机体免疫力
• 1.5.5 产生有益代谢产物，促进营养物质消化吸收
• 1.6 目前微生态制剂存在的问题
• 1.7 微生态制剂的发展方向
• 1.7.1 分子生态学方法在研究肠道微生态学中的应用
• 1.7.2 基因工程菌领域
• 1.7.3 高稳定性制剂
• 1.7.4 专一制剂
• 1.8 反刍动物的消化特点
• 1.9 动物微生态制剂对反刍动物的影响
• 1.10 动物微生态制剂在反刍动物方面的应用
• 1.11 微生态制剂与免疫
• 1.12 研究目的和意义
• 2 试验一 菌种的筛选及其特性研究
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 试验菌株
• 2.1.2 培养基
• 2.1.3 实验动物
• 2.1.4 试验试剂
• 2.1.5 试验主要仪器
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 菌株间拮抗性试验
• 2.2.2 毒性试验
• 2.2.3 耐酸性试验
• 2.2.4 耐胆盐试验
• 2.2.5 拮抗病原菌试验
• 2.3 结果
• 2.3.1 菌株间拮抗性试验结果
• 2.3.2 毒性试验结果
• 2.3.3 耐酸性试验结果
• 2.3.4 耐胆盐试验结果
• 2.3.5 拮抗病原菌试验结果
• 2.3.6 各菌株耐酸、耐胆盐、拮抗病原菌效果比对结果
• 2.4 讨论
• 3 试验二 复合微生态制剂发酵条件的优化及制备
• 3.1 试验材料
• 3.1.1 试验菌株
• 3.1.2 培养基
• 3.1.3 试剂
• 3.1.4 试验主要仪器
• 3.2 试验方法
• 3.2.1 混合发酵培养基的优化
• 3.2.2 发酵工艺中温度的确定
• 2.3.4 产品干燥温度与时间对各种菌的影响
• 2.3.5 复合微生态制剂的制备及有效保存期的确定
• 3.3 结果
• 3.3.1 混合发酵培养基筛选结果
• 3.3.2 发酵工艺中温度的筛选结果
• 3.3.3 发酵工艺中时间的筛选结果
• 3.3.4 产品干燥温度与时间对各种菌的影响结果
• 3.3.5 复合微生态制剂有效保存期试验结果
• 3.3 讨论
• 4 试验三 复合微生态制剂对反刍动物免疫机能的影响
• 4.1 试验材料
• 4.1.1 试验动物
• 4.1.2 复合微生态制剂
• 4.1.3 基础日粮
• 4.1.4 口蹄疫疫苗
• 4.1.5 试剂盒
• 4.1.6 培养基
• 4.1.7 试验试剂
• 4.1.8 试验主要仪器
• 4.2 试验方法
• 4.2.1 试验设计及动物管理
• 4.2.2 血液的采集
• 4.2.3 吞噬调理试验
• 4.2.4 液相阻断法检测 O 型口蹄疫抗体水平
• 4.2.5 数据统计分析
• 4.3 结果
• 4.3.1 吞噬调理试验结果
• 4.3.2 液相阻断法检测口蹄疫抗体效价结果
• 4.4 讨论
• 5 结论
• 致谢
• 参考文献
• 作者简介