论文摘要
一、背景与目的间充质干细胞（mesenchymal stem cells or mesenchymal stromal cells, MSCs）作为成体干细胞的一种,它起源于中胚层。MSCs来源广泛,包括来自不同的种属,如小鼠、大鼠、兔、羊、猪、猴、人；以及来自不同的组织,如骨髓、脂肪、肌肉、肝、胰腺、羊水、脐带血、脐带、胎盘等等。MSCs除了具有干细胞的一般特性：自我更新和多向分化潜能。随着研究的进展,还发现MSCs具有支持造血干细胞移植、免疫调控及旁分泌多种细胞因子的独特特性。正是由于MSCs的这些特性,使得它成为细胞治疗和组织工程领域的研究热点,研究者们把MSCs用于多种人类疾病的治疗,这些疾病包括多发性硬化、GVHD、急性心肌梗塞、心衰、终末期肝脏疾病、克隆氏肠疾病、糖尿病等等。毫无疑问,在近十年间经全世界各个实验室众多研究人员的努力,已经在MSCs的许多方面都取得了巨大的进展,且大部分将MSCs应用到临床前及临床试验的研究都观察到了确切的效果及无明显的副反应。但是目前关于MSCs应用于人类疾病也还是存在争议,比如仍然缺乏鉴定MSCs的特异标记,它的长期疗效及安全性等等。所以对于将MSCs全面应用于临床,造福与广大患者,还有许多工作要深入进行。本研究试图建立从大鼠胎盘分离MSCs的方法,通过体外培养观察它的生物学特性。为其应用于大鼠实验动物模型以获得更理想的实验结果打下基础。二、材料与方法1实验动物SD孕鼠1只,孕13-15天,购自中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心。2实验方法通过胶原酶消化及贴壁法从大鼠胎盘分离并得到MSCs。每天用倒置显微镜观察其形态。用MTT法测定其生长动力学并绘制生长曲线。用流式细胞仪检测其表型及细胞周期。通过组织化学染色法证实其成脂及成骨分化的潜能。3统计学分析采用GraphPad Prism软件完成数据处理。三、结果1大鼠胎盘来源MSCs的形态特征原代细胞8小时后细胞贴壁,24小时内细胞形成集落,壁细胞为梭形、三角形,第一个24小时内就有较多的细胞贴壁生长并开始形成集落,从第2天开始贴壁细胞明显增多,细胞逐渐显示出旋涡状排列生长方式；第3天贴壁细胞即达到80%融合,按1:3比例予以传代；1-3代细胞,形态上明显多样,以梭形为主,伴有卵圆形,扁平状和多角形细胞,细胞体积上也大小不一,第4代细胞大小、形态基本一致,以梭形为主。2大鼠胎盘来源MSCs的生长特性第3代细胞生长曲线,显示第一天细胞生长慢,为潜伏期。从第2天开始即进入快速增殖期,5天后进入平台期。群体倍增时间为42小时。3大鼠胎盘来源MSCs的细胞周期检测细胞周期检测提示G0/G1期、S期、G2期的比例分别为81.07%,11.49%,7.44%,CV为4.38。4大鼠胎盘来源MSCs的表面抗原第4和7代大鼠胎盘来源MSCs均表达CD29,CD90,不表达CD45。5大鼠胎盘来源MSCs的体外诱导成脂和成骨分化成脂诱导后的MSCs经油红O染色可见红色油滴；成骨诱导后的成骨细胞经Von-Kossa染色后可见黑色颗粒。四、结论1、从大鼠胎盘能够分离出MSCs。2、大鼠胎盘来源MSCs与骨髓、脐带来源的MSCs有着相似的细胞形态,以长梭形为主,均呈漩涡状排列生长。3、大鼠胎盘来源MSCs表达CD29和CD90,不表达CD45。4、大鼠胎盘来源MSCs体外可被诱导分化为成脂及成骨细胞。5、大鼠胎盘来源MSCs可为MSCs的研究提供一种新的来源。
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标签：胎盘间充质干细胞论文; 大鼠论文; 生物学特性论文;