VEGF干扰性RNA对鼠视网膜新生血管的抑制作用

论文摘要

目的：探讨血管内皮生长因子(Vascular endothelia growth factor，VEGF165)小干扰RNA（small interference，siRNA）对鼠视网膜新生血管的抑制作用。方法：①采用Smith的方法，将出生后7d的C57BL／6J小鼠置于氧舱，控制氧浓度75％±3％，5天后回到正常氧环境，喂养7天后处死；采用异硫氰酸荧光素-葡聚糖（FITC-Dextran）荧光造影视网膜铺片观察视网膜新生血管的形态，鉴定视网膜新生血管模型；②将出生后7d的8只小鼠于空气中喂养，为正常组。③另24只出生后7d的小鼠放入75％±3％的高氧环境中（同Smith方法），5d后出舱并随机分为3组：对照组、空载体组和基因治疗组。出舱当天，空载体组小鼠玻璃体腔内注射空载体pSilencer2.1-U6 hygro，基因治疗组注射VEGF165siRNA表达质粒pSilencer2.1-U6 hygro，均采用脂质体介导。对照组小鼠不作任何处理。④注射后7d，采用FITC-Dextran荧光造影视网膜铺片观察视网膜新生血管的形态变化，采用免疫组织化学方法检测视网膜中VEGF的表达差异，采用常规病理切片统计突破内界膜的血管内皮细胞细胞核数。结果：①荧光造影视网膜铺片发现，正常组整个视网膜血管分布呈规则均匀的网状结构。对照组和空载体组视网膜血管不规则扩张，中周边部有大量血管新生。基因治疗组后极部视网膜血管迂曲及不规则扩张较对照组和空载体组明显减轻。②免疫组织化学染色显示，正常组视网膜中VEGF呈弱阳性表达；对照组和空载体组视网膜中VEGF呈强阳性表达。基因治疗组与对照组和空载体组相比较，VEGF的表达明显减少。③病理切片显示，正常组很少见到突破视网膜内界膜的内皮细胞细胞核，而对照组和空载体组中均有大量，其发生率为100％。基因治疗组（6.83±4.72）较对照组（11.57±5.85）和空载体组（11.53±6.15）明显减少。统计学分析表明，除对照组和空载体组间差异无统计学意义外（P＞0.05），其余各组间差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论：采用脂质体介导，玻璃体腔注射VEGF165siRNA表达质粒pSilencer2.1-U6 hygro，有效抑制了小鼠缺血性视网膜病变模型新生血管的形成。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 缩略词简表
• 前言
• 第一章 材料与方法
• 1.1 实验材料及主要仪器设备
• 1.2 实验方法
• 第二章 结果
• 2.1 视网膜新生血管模型的鉴定结果
• 2.2 视网膜血管形态变化及分布
• 2.3 视网膜中VEGF的表达
• 2.4 统计分析突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数
• 第三章 讨论
• 第四章 结论
• 参考文献
• 综述
• 致谢
• 攻读学位期间的主要成绩