运用RAPD技术对油松种子园的辅助选择

论文摘要

本研究于 2003-2004 年对种子园 95 个无性系进行子代测定,以一般配合力为主要依据,筛选优良无性系,同时运用 RAPD 标记在 DNA 水平上对油松种子园遗传结构和基因型进行分析,结果表明:95 个无性系间苗高地径差异显著,11 条随机引物扩增出95个位点,其中多态性位点77个,占81.05%,各条引物的Nei’s指数和Shannon’s 多样性指数差别较大,遗传一致度在 0.3474-0.8632 之间变化,遗传变异在基因组中分布不均,进一步证实油松种子园内存在着丰富的遗传多样性。综合 RAPD 标记和子代测定的分析结果,筛选出 25、53、59 号等 15 个一般配合力高的、在秩次排序是优良等级且在 UPGMA 聚类中聚到一起的无性系是基因型优良的无性系,35 个良好无性系和 39 个中等无性系,143、9、135、112、11、145 号无性系是最终淘汰无性系,这四类无性系构成了种子园的遗传结构,在 RAPD 图谱中表现出明显差异, S499-06 和 S3-07 分别与苗高和地径相关,条带越亮越宽则无性系等级越高,条带的亮度和宽度作为辅助选择时在 DNA 水平上的依据 。

论文目录

• 1 引言
• 1.1 种子园建设中遗传多样性的重要性
• 1.1.1 遗传多样性含义
• 1.1.2 种子园遗传多样性的重要
• 1.2 遗传多样性的研究进展
• 1.2.1 形态标记（morphological markers）
• 1.2.2 细胞学标记（cytological markers）
• 1.2.3 同工酶标记（biochemical markers）
• 1.2.4 分子标记（molecular markers）
• 1.3 DNA 分子标记技术在林木育种上的应用
• 1.3.1 DNA 分子标记技术种类及特点
• 1.3.2 RAPD 在林木辅助选择育种中的应用
• 1.4 本研究目的及意义
• 2 种子园子代测定研究
• 2.1 种子园自然概况
• 2.2 试验材料
• 2.3 试验方法
• 2.4 数据处理与分析
• 2.4.1 方差分析
• 2.4.2 一般配合力（GCA）分析
• 2.5 秩次排序法分析
• 2.6 聚类分析
• 3 RAPD 实验
• 3.1 实验方法
• 3.1.1 DNA 的提取
• 3.1.2 总 DNA 含量的测定
• 3.1.3 RAPD 扩增反应
• 3.1.4 扩增产物检测
• 3.2 数据统计与分析
• 3.2.1 多态位点百分数（PPL）（proportion of polymorphici）
• 3.2.2 Nei's 基因多样度（Nei's gene diversity）
• 3.2.3 Shannon's 多样性指数（I）（Shannon’s information index）
• 3.2.4 遗传一致度与遗传距离
• 4 RAPD 实验条件的优化
• 4.1 DNA 的纯化
• 4.2 PCR 反应条件的优化
• 4.2.1 DNA 模板浓度对扩增效果的影响
• 4.2.2 TagDNA 聚合酶对扩增效果的影响
• 4.2.3 dNTP 浓度对扩增效果的影响
• 2+浓度对扩增效果的影响'>4.2.4 Mg²⁺浓度对扩增效果的影响
• 4.2.5 引物浓度对扩增效果的影响
• 4.2.6 同一无性系不同单株扩增结果
• 4.2.7 PCR 反应
• 4.3 引物的筛选
• 5 结果与分析
• 5.1 多态位点百分比
• 5.2 种子园内的遗传变异
• 5.3 种子园内遗传一致度分析
• 5.4 种子园各无性系 RAPD 聚类分析
• 5.5 优﹑良﹑中﹑劣无性系在 RAPD 图谱的差异
• 6 讨论
• 6.1 本研究利用 RAPD 标记的可行性
• 6.2 实验取样策略
• 6.3 RAPD 实验程序优化探讨
• 6.4 种子园改良提高的迫切性
• 7 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附录
• 作者简介