论文摘要
目的通过对孕鼠连续腹腔注射不同剂量的麻黄素获得胚胎期麻黄素成瘾的仔鼠，仔鼠出生后对其灌胃中药小复方，观察中药小复方对发育期的麻黄素仔鼠体重、脑重、大脑颞叶皮层组织结构的影响，检测中药小复方对麻黄素仔鼠的大脑颞叶皮层总抗氧化能力、过氧化氢酶活性、还原性谷胱甘肽含量及Bax蛋白、c-Fos蛋白和TGF-β1阳性表达的影响，研究了孕期注射麻黄对仔鼠发育的影响，探讨了中药小复方对麻黄素仔鼠的治疗和保护作用，分析中药小复方对麻黄素成瘾仔鼠的戒断效果。方法将72例受孕小鼠随机分为4个组，分别腹腔注射不同剂量（2.0g/L、4.0g/L、6.0g/L）麻黄素溶液和等量的生理盐水，受孕第3d开始注射，每天两次，每次0.2mL，注射直至母鼠分娩后十五天；待母鼠分娩后，将各组母鼠所生的仔鼠平均分为两组（一组灌胃中药小复方，一组灌胃生理盐水），共获得八组仔鼠（正常对照组、正常中药组、2.0g/L实验对照组、2.0g/L麻黄中药组、4.0g/L实验对照组、4.0g/L麻黄中药组、6.0g/L实验对照组、6.0g/L麻黄中药组），称量检测各组仔鼠在5d、10d、15d时体重及大脑重量的变化，用生物显微技术观察仔鼠大脑颞叶皮层结构的变化，用比色法检测仔鼠大脑CAT活性、T-AOC、GSH含量的变化，用免疫组织化学法观察了仔鼠大脑颞叶皮层中Bax蛋白、c-Fos蛋白和TGF-β1的表达。结果1)中药小复方能够影响麻黄素仔鼠的体重。除正常中药组外，其余各组体重均低于正常对照组，差异显著或极显著；正常中药组在仔鼠出生15d时高于正常对照组，差异显著；各剂量麻黄中药组明显高于同剂量实验对照组，差异显著或极显著。2)中药小复方能够影响麻黄素仔鼠大脑的重量。正常中药组脑重高于正常对照组（P<0.05），2.0g/L麻黄中药组低于正常对照组（P>0.05）,其余各组的大脑重量均低于正常对照组，差异显著或极显著；2.0g/L麻黄中药组脑重高于2.0g/L实验对照组（P<0.05）；4.0g/L麻黄中药组、6.0g/L麻黄中药组均高于同剂量的实验对照组（P<0.01）。3)中药小复方能够影响麻黄素仔鼠大脑颞叶皮层的发育。正常中药组与正常对照组仔鼠大脑颞叶皮层厚度无显著性差异,其余各组仔鼠大脑颞叶皮层厚度均低于正常对照组（P<0.05或P<0.01）；4.0g/L实验对照组、6.0g/L实验对照组仔鼠大脑颞叶皮层结构不清，神经元发育不良，皮层厚度减少；各剂量麻黄中药组仔鼠大脑颞叶皮层厚度明显高于同剂量的实验对照组，差异显著或极显著。4)中药小复方能够影响麻黄素仔鼠大脑CAT活性、T-AOC及GSH的含量，除2.0g/L实验对照组、2.0g/L麻黄中药组CAT活性下降外，其余各组的CAT活性均升高，且这两组在5d、10d时，CAT活性均高于正常对照组（P<0.05或P<0.01）；其余各组在各期的CAT活性均低于正常对照组（P<0.05或P<0.01），各剂量麻黄中药组CAT活力明显高于同剂量实验对照组，差异显著或极显著。在仔鼠出生后15d内，各组的T-AOC均有不同程度的升高，正常中药组T-AOC高于正常对照组（P<0.05）；在第5d时，2.0g/L实验对照组、2.0g/L麻黄中药组均高于正常对照组（P<0.05）；其余各组在各个时期的T-AOC均低于正常对照组（P<0.05或P<0.01）。各剂量麻黄中药组仔鼠T-AOC均高于同剂量的实验对照组（P<0.05或P<0.01）。仔鼠在生后15d的发育过程中，各组仔鼠大脑的GSH含量均升高，正常中药组在各时期的GSH均低于正常对照组，无显著性差异；2.0g/L实验对照组、2.0g/L麻黄中药组GSH的含量逐渐恢复到正常水平，其余各组GSH含量均低于正常对照组（P<0.05或P<0.01）。在各剂量内，麻黄中药组均高于同剂量的实验对照组（P<0.05或P<0.01）。在生后15d的发育过程中，仔鼠大脑CAT活性、T-AOC及GSH的含量逐渐恢复到正常水平，呈一定的剂量-效应关系，胚胎期受损越轻，组织的恢复能力就越强，经过灌胃中药小复方后，大脑组织的恢复能力加快，与同剂量的实验对照组相比，恢复速度明显加快，效果显著。5)中药小复方能够影响麻黄素仔鼠大脑颞叶皮层Bax蛋白、c-Fos蛋白和TGF-β1的表达。受孕早期注射麻黄素，检测到麻黄素仔鼠的大脑颞叶皮层Bax蛋白、c-Fos蛋白和TGF-β1表达细胞的数量均高于正常对照组（P <0.05或P<0.01）；在生后15d的发育过程中，仔鼠的大脑颞叶皮层Bax蛋白、c-Fos蛋白和TGF-β1的表达均有所下降，各剂量的麻黄中药组与同剂量的实验对照组相比，上述三项指标下降更明显，差异显著或极显著（P<0.05或P<0.01），随着灌胃中药小复方时间的增长，仔鼠的大脑颞叶皮层Bax蛋白、c-Fos蛋白和TGF-β1阳性表达细胞的数量下降趋势明显加快。结论1)孕小鼠注射麻黄素后对仔鼠大脑发育的影响具有长时程效应。妊娠早期接触麻黄素对仔鼠脑神经元的迁移具有毒性作用。在生后15d时各剂量实验对照组和各剂量麻黄中药组的仔鼠大脑重量、颞叶皮层厚度和细胞密度仍小于正常对照组，可能是麻黄素及其代谢产物对胚胎期神经元具有直接毒性作用的延伸结果，各剂量麻黄中药组的仔鼠颞叶皮层厚度和细胞密度明显高于同剂量的实验对照组，可能是中药成分调节了神经细胞的分化和迁移，刺激神经胶质细胞的生成和分化，加强神经胶质细胞对受损神级细胞的修复能力，最终使大脑颞叶皮层厚度及细胞密度增加。2)孕小鼠注射麻黄素后，麻黄素可透过胎盘屏障进入胚胎体内，使仔鼠在胚胎期成瘾，待小鼠出生以后，母鼠仍然注射麻黄素，麻黄素及其代谢产物仍可通过乳汁进入仔鼠体内，从而抑制食欲，使体重减少；中药小复方能够增加机体的新陈代谢，调节机体的免疫系统，清除机体自由基，加快麻黄素在体内的代谢，增强消化与吸收功能，促进进食，最终使体重增加。3)孕小鼠注射麻黄素后引起仔鼠大脑CAT活性、T-AOC及GSH的含量的下降，自由基在细胞内得不到快速有效的清除，使仔鼠大脑组织结构发生改变；中药成分可直接清除自由基，也可间接刺激机体抗氧化能力升高，CAT活性、T-AOC及GSH的含量增加，使机体清除自由基的能力增强。4)麻黄素使大脑颞叶皮层组织结构发生改变，自由基平衡破坏，引起仔鼠大脑颞叶皮层Bax蛋白、c-Fos蛋白和TGF-β1阳性表达的增强，大脑颞叶皮层组织受损程度随着剂量的升高而升高，具有明显的剂量效应关系；在仔鼠出生后15d内，灌胃中药小复方，检测到各剂量麻黄中药组上述三种蛋白的表达量明显低于同剂量的实验对照组，表明中药小复方具有抑制细胞凋亡的作用。