白三烯及其受体在表皮肿瘤发生中的作用及其机制的初步研究

论文摘要

一、研究背景与目的表皮肿瘤是常见的皮肤疾病,其主要来源细胞为表皮的角质形成细胞,恶性表皮肿瘤可发生转移,严重者甚至可危及患者生命。近年来,表皮肿瘤的发病率呈不断上升趋势。表皮肿瘤的病因及发病机制复杂,目前认为主要与环境因素、基因突变及病毒感染有关。该类疾病的治疗多以手术治疗为主,但受到病变范围、病期等诸多因素的限制。因此,深入研究此类疾病的发病机制,对于临床上寻找新的简便有效的防治方法具有重要意义。近年来研究证实,白三烯及其受体（leukotriene receptors,LTRs）参与了人胰腺癌、恶性淋巴瘤、结肠癌等多种肿瘤的发生,是肿瘤发生的一种新机制,其主要机制可能为肿瘤细胞上白三烯受体高表达,发挥了对肿瘤细胞的促增殖作用。另外有研究发现半胱氨酰白三烯受体1（cysteinyl leukotriene receptor 1,CysLTR1）在结肠癌细胞中发生核转位是发挥促增殖作用的重要机制。研究同时表明这种促增殖效应可被相应的受体拮抗剂所阻断;并且有研究表明白三烯B4受体（leukotrienes B4 receptor,BLT）拮抗剂LY293111在治疗肿瘤Ⅰ期和Ⅱ期临床试验中有抗瘤效应。以上研究均提示白三烯及其受体与肿瘤的发生发展相关。目前虽然已有研究报道LTRs在多种组织细胞中表达,但关于LTRs在表皮肿瘤组织中的表达、分布与功能,以及他们在表皮肿瘤发病中作用的研究少见报道。我科在前期研究中已证实半胱氨酰白三烯及其受体在表皮高增殖性疾病银屑病中表达升高,并且文献报道BLT2 mRNA在人的皮肤鳞状细胞癌肿瘤组织中较正常组织相比高表达。我们推测白三烯及其受体参与表皮肿瘤的发生,其机制可能为白三烯与其受体结合后,发挥对表皮肿瘤细胞的促增殖作用,而白三烯受体的表达是否可因外界环境因素（如目光）而诱发,均需要我们进一步深入研究。为探讨白三烯受体参与表皮肿瘤发生的机制,就必然要了解白三烯及其受体对人角质形成细胞的影响。如果能够了解白三烯受体在皮肤组织甚至角质形成细胞中的表达状况与功能,白三烯与紫外线作用于角质形成细胞所发生的生物学作用,将对于评价LTRs在表皮肿瘤发病中的作用以及寻求新的治疗靶位和方法具有积极的意义。二、方法与结果1.采用免疫组化法检测几种表皮肿瘤组织中LTRs的表达。结果:CysLTR1和CysLTR2、BLT1和BLT2在表皮肿瘤、寻常型银屑病、正常皮肤中均有表达。阳性染色主要分布于癌细胞巢、表皮细胞的胞膜及胞浆内,胞核未见明确表达。正常皮肤的皮脂腺及汗腺也可见BLT的表达。与正常表皮相比,鳞状细胞癌（squamous cellcarcinoma,SCC）、基底细胞癌（basal cell carcinoma,BCC）、寻常型银屑病（psoriasisvulgaris,PV）中白三烯受体的表达上调（P＜0.05）;而白三烯受体在Bowen’s病（Bowen’sdisease,BD）、鲍温样丘疹病（Bowenoid papulosis,BP）、脂溢性角化病（seborrheic keratosis,SK）表达与正常皮肤相似（P＞0.05）。相同疾病的同一组织中,CysLTR1和CysLTR2、BLT1和BLT2表达强度无显著差异（P＜0.05）。2.运用白三烯B4（leukotriene B4,LTB4）与中波紫外线（ultraviolet B,UVB）作用人永生化角质形成细胞（HaCaT细胞）,然后首先采用流式细胞术检测细胞周期的变化,运用RT-PCR检测人端粒酶逆转录酶（human telomerase reverse transcriptase,hTERT）在HaCaT细胞中的表达,同时采用免疫细胞化学、免疫荧光结合激光共聚焦显微镜观察、免疫印迹等方法检测HaCaT细胞上BLT及p53的表达。结果:①证实了HaCaT细胞上存在BLT1和BLT2的表达,分布于细胞膜和细胞浆,胞核中未见表达;②LTB4作用HaCaT细胞,hTERT表达上调、细胞增殖指数（proliferation index,PI）增高、BLT表达与空白对照相似;③HaCaT细胞上无突变型p53表达,通过LTB4、UVB及二者共同作用于HaCaT细胞均不能诱发p53的突变,但UVB照射可引起野生型p53表达升高（P＜0.05）;④UVB单次急性照射HaCaT细胞,BLT的表达升高（P＜0.05）,PI降低;⑤LTB4和UVB共同作用HaCaT细胞,HaCaT细胞PI下降,p53、BLT、hTERT的mRNA与空白对照无显著差异（P＞0.05）。三、结论1.CysLTR1和CysLTR2、BLT1和BLT2在SCC、BCC、PV组织中表达升高,提示LTRs可能参与了SCC、BCC、PV的发病过程。2.HaCaT细胞上表达BLT1和BLT2蛋白,并且LTB4能够促进HaCaT细胞的增殖,但这种调控可能不依赖于BLT的核转位。3.UVB照射可诱导HaCaT细胞BLT的表达升高,但同时野生型p53升高,细胞增殖减弱,可能提示UVB急性照射过程中细胞凋亡发挥了主导作用。通过以上实验,为评价LTRs在表皮肿瘤发病中的作用和地位,寻求新的防治靶点奠定了一定的实验基础。

论文目录

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• 论文正文 白三烯及其受体在表皮肿瘤发生中的作用及其机制的初步研究
• 前言
• 第一部分 白三烯受体在表皮肿瘤组织中的表达
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 第二部分 白三烯B4和中波紫外线对永生化角质形成细胞的影响
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 全文结论
• 致谢
• 参考文献
• 文献综述 白三烯B4及其受体与肿瘤
• 参考文献
• 攻读硕士学位期间发表论文